實驗試劑
采用t7• tag affinity purification kit
t7•tag抗體瓊脂。b/w緩沖液：4.29mm na2hpo4，1.47 mm kh2po4，2.7 mm kcl， 0.137mm nacl，1%吐溫-20，ph7.3 洗脫緩沖液: 0.1m檸檬酸，ph2.2. 中和緩沖液：2m tris，ph10.4。 peg 20000。
實驗步驟
1.100ml 含重組表達(dá)質(zhì)粒的菌體誘導(dǎo)后，離心5000g×5min，棄上清，收獲菌體，用10ml預(yù)冷的b/w緩沖液重懸。
2. 重懸液于冰上超聲處理，直至樣品不再粘稠，4℃離心 14000g×30min，取上清液，0.45μm膜抽濾后作為樣品液。
3. 將結(jié)合t7•tag抗體的瓊脂充分懸起，平衡至室溫，裝入層析柱中。
4. b/w緩沖液平衡后樣品液過柱。
5. 10ml b/w緩沖液過柱，洗去未結(jié)合蛋白。
6. 用5ml洗脫緩沖液過柱，每次1ml，洗脫液用含150μl中和緩沖液的離心管收集，混勻后置于冰上，直接sds-page分析。
7. 將洗脫下來的蛋白放入透析袋中，雙蒸水透析24hr，中間換液數(shù)次。
8. 用peg 20000濃縮蛋白。
注意事項
蛋白在過層析柱前，要0.45μm膜抽濾，否則幾次純化后，柱子中會有不溶物。