試劑盒應(yīng)用
本試劑盒適用于真菌(例如酵母、霉菌、擔(dān)子菌)、細(xì)菌、病毒等微生物擴(kuò)增。無需研磨,無需酶
類消化處理,無需經(jīng)過硅膠膜或磁珠提取純化,只需要將樣本放入專用裂解液中,保證基因組完整
性。操作簡,只需要10-15 分鐘即可將裂解物產(chǎn)物作為擴(kuò)增模板,加入到2× mic smart mix 中。2× mic
smart mix 包含修飾的dna 聚合酶,相較于普通pcr,具有更高的保真度和更高的產(chǎn)量。pcr 產(chǎn)物
的3’含有a 末端,可直接克隆到t 載體。
本試劑盒僅供研究使用,不可用于臨床、食品、化妝品等領(lǐng)域。
試劑盒組成
保存條件
-20oc 保存。
mic buffer 和2× mic smart mix 長期使用可放在4℃,避免反復(fù)凍融。
需要準(zhǔn)備
金屬恒溫浴、pcr 儀
使用方法
一、不同樣品的處理方法
1. 酵母菌/細(xì)菌/病毒/霉菌等培養(yǎng)液
(1)取10μl 培養(yǎng)液和20μl mic buffer 充分混勻。
(2)置于55℃作用5 分鐘,溶液即為dna 模板。
2. 酵母菌/細(xì)菌/霉菌菌落
(1)挑取單菌落置于500μl 生理鹽水中,渦旋混勻。
(2)加入20 μl mic buffer,充分混勻。
(3)置于55℃作用5 分鐘,溶液即為dna 模板。
3. 蘑菇類或者組織
(1)方法一:剪取1-4mm 菌蓋或者組織,加入20μl mic buffer 充分混勻。
方法二:綠豆大小菌蓋或者組織塊放入組織勻漿器中研磨1-2 分鐘。取10-20μl 與20μl mic
buffer 充分混勻。
(2)置于55℃作用5 分鐘,溶液即為dna 模板。
二、推薦pcr 反應(yīng)體系
三、按照以下方法設(shè)定pcr 反應(yīng)
注意事項(xiàng)
一、試劑盒使用前注意事項(xiàng)
(1)所有試劑應(yīng)按照溫度儲存。請勿反復(fù)凍融。
(2)使用前后均需要對操作區(qū)進(jìn)行消毒,消毒方式可以采用75%乙醇或核酸消除劑等。耗材均
需使用商品化的無酶耗材。
(3)2× mic smart mix 頻繁使用,可在4℃保存。長期不使用可放-20℃保存。
二、試劑盒使用過程中注意事項(xiàng)
(1)pcr 過程中推薦使用陰性對照和陽性對照。
(2)整個過程中使用的吸頭、離心管等耗材應(yīng)丟棄在含有75%乙醇或核酸消除劑的容器中,減
少環(huán)境污染。
(3)2× mic smart mix 包含染料,可在反應(yīng)結(jié)束后直接進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳。
(4)為防止試劑盒污染,請勿將不同批號試劑盒混用。