用hitachi cr—g離心機(jī),r10h轉(zhuǎn)頭分離pcr后(dna或其他生物大分子)樣品
a液:20%peg6000,2.5m nacl 及isopropanol (異丙醇)
分離步驟:
1.用384孔板或96孔板,按比例增加容量,在pcr儀中擴(kuò)增反應(yīng)后
2.每孔內(nèi)含10ul pcr后樣品及10ul a液
3.微板先用搖床充分混勻。
4.對稱加入p10h轉(zhuǎn)頭(二塊或四塊,384孔板)
5.離心10,000rpm(約13,000xg)×10分,4℃,加速“9”,減速“9”
6.取出微孔板
7.用kimtowels 紙貼在r10轉(zhuǎn)頭放微板架的內(nèi)壁
8.去掉微板蓋并把微板倒過來放入r10h 轉(zhuǎn)頭微板架。
9.預(yù)置轉(zhuǎn)速1000rpm,10分,4℃,加速“9”,減速“9”,在速度顯示到達(dá)300rpm時停車。
10.從微板中取出轉(zhuǎn)頭,沉淀可作出進(jìn)一步實驗。
特點:1. 轉(zhuǎn)速高(一般微板轉(zhuǎn)頭都在5000rpm,4000xg以下)回收率高。
2. 沉淀緊,反向低速離心后上清全部被紙吸干。
3. 用于dna測序前樣品制備最合適。
離心機(jī)