在免疫酶技術(shù)中，我們首先要確定的變異因素就是酶標(biāo)記物的工作濃度。因?yàn)槊笜?biāo)記物濃度的很小變化，便可導(dǎo)致試驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生很大的波動(dòng)。另外，由于濃度過(guò)高，可使非特異性反應(yīng)增加，而濃度過(guò)低又可影響測(cè)定的敏感性。因此，正式試驗(yàn)前必須準(zhǔn)確滴定其工作濃度。
1. 酶標(biāo)記抗體的滴定方法是：將抗原（或抗體）物理吸附于固相載體上，然后將經(jīng)過(guò)一系列稀釋的酶標(biāo)抗體（或抗ig抗體）與吸附在載體上的抗原（或抗體）起反應(yīng)，以酶與底物的顯色反應(yīng)程度來(lái)確定酶標(biāo)記抗體的效價(jià)，或稱(chēng)工作濃度。
2. 其步驟為：先將抗原（或抗體）用0.05m ph9.6包被緩沖液稀釋為10μg/ml左右，于聚苯乙烯板孔內(nèi)加0.1ml，4℃一夜，次日以洗滌緩沖液洗滌3次。酶標(biāo)記抗體用1%bsa-pbs液依次稀釋成1:100，1:200，1:400，1:800，1:1600（根據(jù)據(jù)抗體的滴度而定），分別加入反應(yīng)孔中，每個(gè)稀釋度二孔，每孔0.1ml，37℃孵育1小時(shí)后洗滌。然后加底物液，每孔0.1ml，37℃10～30分鐘。以2m h２so4 0.05ml終止反應(yīng)。
3. 結(jié)果判定主要以elisa比色儀讀取各孔o(hù)d值，并以od為縱座標(biāo)，結(jié)合物濃度為橫座標(biāo)，繪制滴定曲線(xiàn)。由曲線(xiàn)上查得od值為1.0左右，且曲線(xiàn)斜率zui大時(shí)的酶標(biāo)抗體稀釋度，即為該標(biāo)記物的工作濃度。
上海紀(jì)寧生物科技有限公司主要經(jīng)營(yíng)進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)elisa試劑盒、細(xì)胞、血清、抗體、金標(biāo)試劑盒、生物試劑、耗材、培養(yǎng)基、一抗、二抗、免疫酶等產(chǎn)品，是一家專(zhuān)門(mén)從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品研發(fā)和銷(xiāo)售的綜合性生物科學(xué)公司,產(chǎn)品國(guó)內(nèi)大部分地區(qū)。公司專(zhuān)注于高品質(zhì)elisa試劑盒的整合和研發(fā)，打造國(guó)內(nèi)的elisa試劑盒。
關(guān)鍵詞：比色儀