人正常組織來源細胞是我們實驗室*的實驗產(chǎn)品之一,那么細胞感染是什么東西引起?有了細胞感染要注意那么方面?今天就為大家分析細胞感染的方法。
(一)細胞準備
將狀態(tài)良好的目的細胞接種到24孔板,使細胞濃度為 1×105/ml 細胞,接種細胞數(shù)量因細胞的生長速度而略有不同, 一般是保證第二天進行病毒感染的時候細胞匯合率介于 50%至70%之間。
(二)病毒感染
1.感染細胞z佳moi 的測定moi(multiplicity of infection,感染復(fù)數(shù))是指每個細胞感染的病毒數(shù),通常moi 越高,病毒整合到染色體的數(shù)量以及目的蛋白的表達量越高。對于分裂活躍的細胞,比如 hela、293 細胞,moi=1~3 時,80%以上的細胞均表達目的基因。而對于非分裂細胞,比如原代細胞,感染效率較低。需要進行moi梯度摸索實驗,選擇適合的moi 進行實驗。
2.感染步驟
按實驗需要將細胞鋪板(比如12孔板);細胞數(shù)以第2天密度約50%為宜;37℃ 培養(yǎng)過夜。
對于polybrene 可施加的細胞:準備*培養(yǎng)基和 polybrene混合物,polybrene 終濃度為摸索得到的z適終濃度。移去培養(yǎng)基并添加 0.5 ml polybrene/培養(yǎng)基混合物于每孔中(適用于24 孔板,其他孔板請相應(yīng)調(diào)整體)。
對于不適用 polybrene 的細胞,以上步驟省略,直接進入下面步驟:
感染前,從冰箱取出并在 37℃水浴中快速融化病毒,吸去人正常組織來源細胞原有培養(yǎng)基,將病毒原液加入細胞中,輕輕8字混勻。感染后第二天(約12小時),吸去含病毒的培養(yǎng)液,換上新鮮的*培養(yǎng)液,繼續(xù)37℃培養(yǎng)。感染后48小時,對于帶 gfp報告基因的病毒,可通過熒光顯微鏡觀測gfp表達效率,對于攜帶 puromycin抗性基因的病毒,換上含適當濃度的 puromycin 的新鮮*培養(yǎng)液,篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)導(dǎo)的細胞株。
epor 上調(diào)基因4抗體(c端)
eppin 山梨醇脫氫酶抗體
eps8 殺菌肽/天蠶抗菌肽抗體
epx 色素上皮源性因子抗體
er/pr/c-erbb-2 kit(mo monoclonal) 色氨酸羥化酶抗體
erab 三葉肽因子3抗體
er-alpha 三葉肽因子2抗體
er-alpha 三羥酰輔酶a脫氫酶抗體
er-alpha 三羥基*基輔酶a裂解酶抗體
er-alpha 三羥基*基輔酶a還原酶抗體
er-alpha/beta 三羥基*基輔酶a合成酶2抗體
erbb-3/her3 三羥基*基輔酶a合成酶1
人正常組織來源細胞