鳳仙是鳳仙花科鳳仙花屬多年生常綠草本植物。新幾內(nèi)亞鳳仙是鳳仙花家族中的一個新品種。它花色豐富,四季開花,花期長,葉色獨具特色,作為周年供應的時尚盆花,日益受到了人們的青睞。它的傳統(tǒng)繁殖方法是通過播種繁殖,但播種繁殖需要恒定的溫度,而且種子價格比較昂貴,發(fā)芽率低。近年來,用無性繁殖,利用組織培養(yǎng)技術,既可以在短期內(nèi)取得大量的優(yōu)質(zhì)脫毒苗,又可避免因常規(guī)無性繁殖而導致的種性退化。具體可用新幾內(nèi)亞鳳仙的莖段作為外植體,對其進行離體快速繁殖。
材料與方法
試材處理
從新幾內(nèi)亞鳳仙植株上剪取帶有腋芽的嫩梢,去掉葉,先用自來水沖洗10分鐘,再用洗潔劑溶液洗滌1-2次。在無菌條件下,依次用70%的酒精浸泡30秒鐘,2%的次氯酸鈉浸泡12分鐘,無菌水沖洗3-5次。最后將處理好的嫩梢切成每個節(jié)間約0.5cm長的帶芽莖段接種在預制好的初代培養(yǎng)基上。
培養(yǎng)條件
分化培養(yǎng)基的選擇 以ms作為基本培養(yǎng)基,分別設置ba0.5、1.0、1.5、2.0 mg /l,naa0.2、0.4、0.6、0.8mg/l各4種濃度,共16個組合。篩選分化培養(yǎng)基中ba和naa最佳組合,3次重復。各培養(yǎng)基組合均加入蔗糖3%-4%,瓊脂6-8g,ad30mg/l,調(diào)ph值為5.8。
生根培養(yǎng)基的選擇 以ms為基本培養(yǎng)基,設置iba0.3、0.6、0.9、1.2、1.5mg/l5種濃度,摸索最佳生根條件。各培養(yǎng)基均加入蔗糖2%-2.5%,瓊脂6-8g,調(diào)ph值為5.8。
繼代培養(yǎng)
新接的外植體約30天萌發(fā)成苗,苗高2-3cm時,將小苗剪成0.5cm長帶芽莖段,放入分化培養(yǎng)基中繼代培養(yǎng)。
生根培養(yǎng)
小苗高3cm左右時,從基部剪下,接種于生根培養(yǎng)基上,進行生根培養(yǎng)。
小苗移栽
小苗生根培養(yǎng)根長達2cm時,進行移栽,先移入溫室中煉苗1-2天,溫室中培養(yǎng)2-3周后上盆。
結果與分析
不同濃度的ba和naa組合對新幾內(nèi)亞鳳仙分化出苗的影響
以ms作基本培養(yǎng)基,4種濃度ba和4種濃度naa組合,對新幾內(nèi)亞鳳仙出苗影響見表1。
結果表明:芽的增殖和嫩梢的增長不僅取決于ba、naa的絕對數(shù)量,而且取決于二者相對比例。濃度最大ba/naa條件下,繁殖系數(shù)17達最大,而且嫩梢生長度也達到最大1.23,濃度最小ba/naa條件下,繁殖系數(shù)、嫩梢長度之比為10/0.67,二者絕對值處于中間狀態(tài)。綜合芽的形成和嫩梢生長兩種情況看:高濃度的ba與naa配合時,嫩梢生長較正常,平均株高1.09cm,增殖倍數(shù)為14,較低濃度的ba與naa配合時,繁殖系數(shù)為8.9,平均株高為0.68cm,長勢不良,實驗條件下以ba2.0mg/l+naa0.2mg/l效果為最佳。
不同濃度的iba對生根的影響
以ms為基本培養(yǎng)基,5種濃度iba條件下生根效果見表2。
結果表明:開始生根天數(shù)隨iba濃度加大而縮短,iba濃度從0.3-0.9mg/l范圍內(nèi),隨濃度加大,生根率、每株根數(shù)增加,超過0.9mg/l,生根率下降。且多形成粗大根,產(chǎn)生愈傷組織或從愈傷組織上再生根。實驗條件下,以0.9mg/l生根效果最好,生根較快,根系生長正常,根數(shù)較多。
小苗移栽
已生根小苗經(jīng)20天,待根長達2cm時,取出試管苗,洗去根上瓊脂,移至透水通氣的蛭石中,先在培養(yǎng)室中溫度20℃-25℃,相對濕度65%-75%條件下培養(yǎng)2-3周,然后移至散射自然光下煉苗1-2周,最后上盆進入溫室,成活率可達95%以上。這期間除了注意保溫保濕外,土壤濕度不宜太大,溫度以23℃-25℃為好,注意采用殺菌劑保護,避免幼苗腐爛死亡。
結 論
ms+ba2.0mg/l+naa0.2mg/l+ad30g/l+蔗糖3%+瓊脂8g/l,調(diào)ph值為5.8是新幾內(nèi)亞鳳仙莖段培養(yǎng)較為理想培養(yǎng)基。繼代培養(yǎng)天數(shù)約為30天左右,繁殖系數(shù)可達17,嫩梢生長正常。
在ms+iba0.9mg/l+蔗糖2.2%+瓊脂7g/l,調(diào)ph值為5.8的培養(yǎng)基上,新幾內(nèi)亞鳳仙試管苗生根效果較好,生根率可達95.4%,根系發(fā)達,植株生長旺盛。
生根兩周后的試管苗尚需煉苗2-3天,經(jīng)培養(yǎng)室移植培養(yǎng)2-3周,自然光下1-2周煉苗可上盆入溫室,成活率達95%以上,小苗成活關鍵是基質(zhì)選擇及溫、濕度控制。