樹莓屬薔薇科懸鉤子屬多年生灌木，為寒溫帶小漿果，有較強(qiáng)的適應(yīng)性，栽培比較簡單粗放，管理容易。定植第2年即可結(jié)果，第3年進(jìn)入盛果期，此后可豐產(chǎn)、穩(wěn)產(chǎn)達(dá)15～20年。一般品種產(chǎn)量大約在15 000 kg/ h㎡左右。樹莓含有多種維生素，其中維生素c的含量是蘋果的5倍、葡萄的6倍。維生素e含量為水果之首，sod、氨基丁酸等抗衰老，抗癌防癌物質(zhì)含量豐富，根莖葉也具有藥用功效。由于樹莓營養(yǎng)價(jià)值高，速凍出口銷路好，因此成為一種正在大力開發(fā)栽培的新興果樹，被稱為“第三代水果”。國際市場上樹莓漿果主要用于加工，被加工成果汁、果醬、果酒、果凍、口香糖及各種食品的添加劑、添色劑等，國內(nèi)零星栽培時(shí)有用于制汁、制酒，也有用于鮮食的，是一種待開發(fā)的天然保健果品和藥品資源。樹莓分紅莓和黑莓2大系列，是當(dāng)今風(fēng)靡世界的第3代水果中的佼佼者，由于它的維生素e、sod、氨基丁酸等抗衰老物質(zhì)含量都高于現(xiàn)有水果及其他野果，特別是紅莓的抗癌物質(zhì)鞣化酸含量豐富，歐美稱之為“紅寶石”。試驗(yàn)主要以美國選育的黑樹莓品種‘三冠王’和紅莓品種‘紅莓38’為材料，對(duì)其初代培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)、生根培養(yǎng)以及煉苗和移栽等一系列問題進(jìn)行系統(tǒng)研究，探討適合黑莓‘三冠王’和‘紅莓38’組培的最佳培養(yǎng)基類型、煉苗和移栽方式，為加快實(shí)現(xiàn)樹莓優(yōu)良品種種苗大規(guī)模工廠化生產(chǎn)奠定基礎(chǔ)，為試管苗工廠化生產(chǎn)提供技術(shù)依據(jù)。
1 供試材料
筆者從河南省新鄉(xiāng)市封丘縣留光鄉(xiāng)青堆村樹莓專業(yè)合作社—樹莓種植基地的地栽樹莓品種黑莓‘三冠王(triplecrown)’和紅莓‘紅莓38號(hào)’的母株上，取生長健壯的枝條為外植體。這2個(gè)品種適宜在我國華中、華北、西北等地栽培，其材料引自中國林業(yè)科學(xué)研究所。
2 外植體取材
我們于2008年7月16日，在河南省新鄉(xiāng)市封丘縣留光鄉(xiāng)青堆村樹莓種植基地選生長健壯的無病蟲害母株，剪取生長力較強(qiáng)的莖段、莖尖去除大葉，裝入塑料袋帶回室內(nèi)保濕保存。
3 培養(yǎng)基的配制
整個(gè)培養(yǎng)過程中采用ms為基本培養(yǎng)基。在外植體的不同發(fā)育階段分別添加不同種類和濃度的植物激素、蔗糖3. 0%、ph值5. 6～5. 8、瓊脂粉4. 0～4. 5 g/ l固化，分裝后在121℃條件下滅菌20 min，放置備用。其中：(1)誘導(dǎo)腋芽生長培養(yǎng)基為ms+ 6- ba 1. 0 mg/ l+ iba 0. 1 mg/ l;(2)繼代增殖培養(yǎng)基為ms+ 6- ba 1. 5 mg/ l+ iba 0. 03 mg/ l;(3)生根培養(yǎng)基為1/ 2 ms+ iba 0. 2 mg/ l+ 活性炭0. 2%。
4 無菌系的建立
將去除葉片的莖段、莖尖在自來水下沖洗約30 min，除去表面污染物，在超凈工作臺(tái)上用刀片去掉莖段上的刺和絨毛，放入大燒杯中，先用75%酒精浸泡15～20 s，再用0. 1%升汞溶液消毒15 min，最后用無菌水漂洗5次，無菌濾紙吸干水分。將消毒好的外植體放入無菌瓶中接種備用。此階段主要解決滅菌、防止污染問題，可以通過各環(huán)節(jié)嚴(yán)格操作和將母株用殺菌劑處理后再取材等措施提高滅菌效果。
5 誘導(dǎo)腋芽生長
將消毒好的樹莓外植體，首先去除兩端切口與消毒液接觸部分少許，然后將其切割成帶有1個(gè)腋芽的小段，接種于腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基ms+ 6- ba 1. 0 mg/ l+ iba 0. 1 mg/ l上進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)室溫度(26±2)℃，光照強(qiáng)度1 000～2 000 lx，每天光照12 h。5 d后，腋芽開始萌動(dòng)生長，經(jīng)過15 d左右的培養(yǎng)，外植體全部萌動(dòng)，并膨大、伸長，芽苗生長快的可達(dá)1. 5～2. 0 cm，基部產(chǎn)生少量愈傷組織。20～25 d嫩莖達(dá)4～5 cm時(shí)，切成帶有1～2個(gè)芽的莖段，轉(zhuǎn)接于新鮮的腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上繼代培養(yǎng)。10 d后，長出嫩莖，基部產(chǎn)生少量愈傷組織，并開始出現(xiàn)叢生芽，每一個(gè)外植體2～7個(gè)不等，20 d后，芽苗長4 cm。
6 繼代培養(yǎng)
將萌發(fā)長成苗的腋芽切割下，接種于繼代增殖培養(yǎng)基ms+ 6- ba 1. 5 mg/ l+ iba 0. 03 mg/ l上，一般30 d 后可長出叢生芽，繼代周期為35～50 d，增殖倍數(shù)5～7倍。要獲得試管繁殖的高效率，植物激素配比是重要因素。為了確定較佳的第一作者簡介：郭玉霞(1980-)，女，助理研究員;從事果樹與激素配比，我們配置了以ms為基本培養(yǎng)基，另加植物激素的幾種不同激素濃度的培養(yǎng)基。在試驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)，6- ba/ iba比值越大越有利于芽分化。結(jié)果顯示，試驗(yàn)所采用的誘導(dǎo)培養(yǎng)基芽分化雖然較少，但分化的芽都為有效芽。最終篩選出此培養(yǎng)基為最佳的繼代增殖培養(yǎng)基。此外還發(fā)現(xiàn)，在繼代培養(yǎng)的接種操作時(shí)，切去嫩莖的頂芽后，再轉(zhuǎn)接于新鮮培養(yǎng)基上，對(duì)嫩莖增殖有很大的促進(jìn)作用。樹莓品種不同，在相同激素水平、相同條件下的生長有很大差異。因此在樹莓用于工廠化組培生長中，不需要盲目追求過高的分化系數(shù)，而要求最佳成苗數(shù)，因此6- ba濃度不宜超過1. 5 mg/ l。利用樹莓組培技術(shù)繁殖速度快，苗生長健壯，是樹莓優(yōu)良品種種苗繁殖的主要途徑。
7 誘導(dǎo)生根
繼代獲得較多的叢生芽后，將長約4～5 cm的芽苗挑出接種于培養(yǎng)基1/ 2 ms+ iba 0. 2 mg/ l+ 活性炭0. 02%上，進(jìn)行誘導(dǎo)生根培養(yǎng)。培養(yǎng)條件同前。此期選擇整齊一致的無根苗進(jìn)行生根培養(yǎng)，這對(duì)以后成批形成規(guī)范化和標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)的商品成株至關(guān)重要。接種5 d左右，黑莓品種‘三冠王’就可以出現(xiàn)3～4條健壯白根，而‘紅莓38’則需10 d左右，芽苗迅速長高具有4～6片葉，即可移栽。在生根培養(yǎng)基中加入0. 2 g/ l活性炭對(duì)樹莓某些品種嫩莖生根有良好促進(jìn)作用。
8 煉苗移栽
在組織培養(yǎng)的過程中，試管苗移栽的成功與否也是一個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)，因?yàn)樵嚬苊缭谠嚬苤袩o論生長多好，移栽若不成功則導(dǎo)致前功盡棄。在試驗(yàn)中，當(dāng)試管苗具有4～6片葉、5～6條根時(shí)即可移栽。移栽前要對(duì)試管苗進(jìn)行通風(fēng)煉苗，先將生根試管苗拿出培養(yǎng)室，去掉封口膜，使嫩苗逐漸與外界接觸，提高適應(yīng)能力，常溫下煉苗3 d后，接著向瓶中加入少量溫水，以軟化培養(yǎng)基。移栽時(shí)用鑷子輕輕取出試管苗，將根部培養(yǎng)基沖洗干凈，移栽到已消毒的純砂∶草炭= 1∶1的混合基質(zhì)中。在處理基質(zhì)時(shí)，用代森錳鋅1 000倍液噴霧，充分拌勻后用水淋透，在移栽后的10 d內(nèi)要注意適當(dāng)遮陰保濕，然后打開遮陰物，在這之間要及時(shí)噴水以保證基質(zhì)潮濕。試驗(yàn)結(jié)果表明：植株移栽成活率為90. 0%以上。