茶樹(shù)α-tubulin基因的原核表達(dá)及其多克隆抗體的制備

發(fā)布時(shí)間:2024-03-03
根據(jù)茶樹(shù)α-微管蛋白(α-tubulin)的mrna全長(zhǎng)序列(genbank登錄號(hào)dq340766)設(shè)計(jì)引物,以rt-pcr方法擴(kuò)增茶樹(shù)α-tubulin基因,將擴(kuò)增產(chǎn)物克隆到原核表達(dá)載體pet-32a(+)上,并轉(zhuǎn)化至大腸桿菌bl21trxb(de3)中,經(jīng)異丙基-β-d硫代半乳糖苷(iptg)誘導(dǎo)后以包涵體形式表達(dá)。以純化后的α-tubulin融合蛋白制備兔多克隆抗體,用westernblot方法檢測(cè)抗體特異性。結(jié)果顯示α-tubulin蛋白以包涵體形式大量表達(dá),以融合蛋白制備的抗體對(duì)茶樹(shù)體內(nèi)的α-tubulin具有良好的特異性。完成機(jī)構(gòu):安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)茶葉生物化學(xué)與生物技術(shù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,安徽合肥230036
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