吡蟲啉是一種新型的硝基亞甲基類的高效內(nèi)吸性廣譜而且殘效期長的殺蟲劑，具有胃毒和觸殺作用，其有效成分為1-（6-氯吡啶-3-吡啶基甲基）-n-硝基亞咪唑垸-2-基胺，分子式為c9h10cin5o2。其殺蟲機(jī)制主要是選擇性抑制昆蟲神經(jīng)系統(tǒng)煙酸乙酰膽堿酯酶受體，從而阻斷昆蟲中樞神經(jīng)系統(tǒng)的正常傳導(dǎo)，
造成害蟲出現(xiàn)麻痹進(jìn)而死亡。近年來吡蟲啉被廣泛用于茶葉生產(chǎn)上，主要用于防治茶小綠葉蟬，目前日本肯定列表中吡蟲啉mrl定為100mg/kg，歐盟ec149/2008中的mrl為0.05mg/kg， 韓國等也對茶葉中吡蟲啉殘留提出檢測要求。
目前國內(nèi)外巳有吡蟲啉殘留量檢測方法的相關(guān)報道，包括在蔬菜、水果中的檢測方法，且大多數(shù)采用hplc-uv或者lc-ms/ms法進(jìn)行檢測但未見采用spe-gc/ms法測定吡蟲啉在茶葉中殘留檢測的報道。因此，研究建立吡蟲啉在茶葉中的spe-gc/ms檢測方法，對提高吡蟲啉殘留檢測方法的快速、簡便和經(jīng)濟(jì)性具有一定的借鑒意義。
1材料與方法
1.1儀器與試劑1.1.1儀器
agilent 7890a-5975c氣相色譜-質(zhì)譜（gc-ms） 聯(lián)用儀，美國安捷倫公司；cs501旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海瑞立科學(xué)儀器有限公司；ika t10均質(zhì)機(jī)，德國ika公司；vm06型6位大體積負(fù)壓spe 裝置，天津agela公司。
1.1.2試劑
正己垸、丙酮、乙酸乙酯為分析純，杭州化學(xué)試劑有限公司；乙腈為色譜純，天津市四友醫(yī)學(xué)生物有限公司；6ml tpt相萃取柱，天津agela公司；吡蟲啉標(biāo)準(zhǔn)品（純度≥95%），德國dr.ehrenstorfer
1.1.3茶葉樣品
國家茶葉質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心提供。
1.1.4標(biāo)準(zhǔn)溶液配置
準(zhǔn)確稱取吡蟲啉標(biāo)準(zhǔn)品，用乙腈超聲溶解，配成100ug/ml的標(biāo)準(zhǔn)母液，使用時將標(biāo)準(zhǔn)儲備液稀釋成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。
1.2樣品前處理
1.2.1樣品制備
按gb/t 8303-2002制備試樣。
1.2.2提取和凈化
據(jù)文獻(xiàn)報道，乙腈對吡蟲啉的提取效率較好， 對燜堿類農(nóng)藥的提取效果都比較理想，均大于70%，并且乙腈對基質(zhì)的選擇性較大，因此提取液中的色素以及脂類物質(zhì)含量較少，這大大方便了之后的凈化過程。
茶葉中含有大量的葉綠素、茶紅素、茶黃素、胡蘿卜素、茶多酚和其他大量不確定的干擾物，雖然采用乙腈提取可以選擇性地除去一部分茶葉基質(zhì)，但是還需做進(jìn)一步的凈化處理以除去剩余的色素和其他小分子雜質(zhì)?；钚蕴啃≈芎芎玫匚缴?，氨基柱能有效地吸附有機(jī)酸和糖分，將這兩種小柱串聯(lián)在一起凈化效果較好。因此，本實驗選用乙腈作為提取劑，進(jìn)行實驗。
（1）提取。稱取2.00g粉碎好的茶葉于10ml離心管中，加人乙腈6ml，15000r/min均質(zhì)提取1min,4000r/min離心5min，取上清液于200ml平底燒瓶中。殘渣用乙腈重復(fù)提取一次，離心，合并二次提取液，40℃浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至1ml左右，待凈化。
〈2）spe凈化
1）活化。將5ml乙腈/丙酮/乙酸乙酯=3：2：1 的混合液以每秒1滴的速度通過tpt固相萃取柱，并保持柱子濕潤。
2）洗脫。將濃縮液用洗脫液洗入固相萃取柱，以每秒1滴的速度通過小柱，并收集于100ml圓底燒瓶中；再用20ml混合洗脫液（乙腈/丙酮/ 乙酸乙酯=3:2:1）分4次洗脫固相萃取小柱，合并收集于20ml圓底燒瓶中。
3）定容。40℃下減壓濃縮至1ml，吹干，用正己垸定容至5ml，供gc-ms檢測。
1.2測定條件
色譜柱：db-1701石英毛細(xì)管柱（30m*0.25mm*0.25um）載氣：氦氣he,純度≥99.999%。，流速1.2ml/min；進(jìn)樣口溫度290℃；進(jìn)樣量1ul，非分流進(jìn)樣；色譜柱升溫程序：70℃保持1min，然后以20℃/min℃程序升溫至280℃ ，再以5℃/min升溫至290℃，保持110min，再以10℃/min 升溫至300℃，保持5min；電離方式為電子轟擊電離源（ei）70ev接口溫度280℃；四級桿溫度150℃，離子源溫度230℃；溶劑延遲7min。
1.3標(biāo)準(zhǔn)曲線
將吡蟲啉標(biāo)準(zhǔn)母液用正己烷稀釋成0.02-8.0mg/kg,，在上述儀器條件下，將1ul不同濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)人氣相色譜儀，測定gc/ms對吡蟲啉響應(yīng)的線性關(guān)系。
1.4方法回收率
在農(nóng)殘檢測中通常以在空白樣品中添加一定濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，然后檢測其添加回收率，來衡量檢測方法的可靠性氣在本試驗中，以茶葉樣品中含吡蟲啉0.08-1.60mg/kg的添加量在空白樣品中添加標(biāo)準(zhǔn)溶液，再按前述的樣品處理方法處理，檢測樣品中吡蟲啉的實際濃度，并計算添加回收率。
1.5定性和定量方法
選擇吡蟲啉質(zhì)量數(shù)較大、相對豐度較大的碎片離子作為定量離子，依此原則再選擇1-3個碎片離子作為定性離子，以定量離子和定性離子共流出與否以及豐度比來判斷樣品是否含有目標(biāo)化合物，由定量離子積分來定量。
2 結(jié)果與討論
2.1氣質(zhì)聯(lián)用操作條件的確定
由于茶葉中基質(zhì)相對比較復(fù)雜，通過sim可有效消除基質(zhì)的干擾。實驗證明，該儀器分析方法雜質(zhì)峰少，分離效果好，基線平穩(wěn)且保留時間適中。
2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的確定
通過測定吡蟲啉絕對進(jìn)樣量為0.02mg/l, 0.2mg/l， 0.4mg/1. ， 0.8mg/l ， 1.6mg/l時的峰面積，以絕對進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制進(jìn)樣量峰面積。
結(jié)果表明，進(jìn)樣濃度和峰面積之間有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r?=0.9927?；貧w方程如下：
y=116.76x+21.262
2.3方法的回收率實驗
按上述色譜條件及檢測步驟，進(jìn)行添加回收率試驗，結(jié)果如表2所示。結(jié)果表明，在0，08~ 1.60mg/kg添加濃度范圍內(nèi)，吡蟲啉在茶葉中的回收率為85.27%-95.88%。，變異系數(shù)均小于8%......按上述方法測得檢測器最小檢出量為4.00*10﹣？？g， 樣品的最低檢出濃度分別為0.018mg/kg
2.4精密度實驗
對吡蟲啉添加濃度為0.80mg/kg的茶葉樣品分別重復(fù)5次用本法檢測，實驗結(jié)果見表3，可以看出該回收率方法的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（rsd）小于5%，該方法的精密度達(dá)到要求。
3 結(jié)論
吡蟲啉是一種中等毒性的殺蟲劑，具有廣闊的市場空間，因此，建立穩(wěn)定的檢測方法顯得尤其重要。對我國安全農(nóng)產(chǎn)品的檢測來說有非常重要的現(xiàn)實意義。
由以上實驗結(jié)果和論述可以看出，該方法是一種快速、準(zhǔn)確、有效的茶葉農(nóng)殘測定方法。在前處理環(huán)節(jié)，采用了乙腈作為提取溶劑，既能有效提取各種農(nóng)藥，又對茶葉中的復(fù)雜基質(zhì)有選擇性，因此有效地降低了基質(zhì)效應(yīng)；凈化過程中采用的tpt小柱可以吸收大部分色素、糖類物質(zhì)而不保留目標(biāo)化合物，從而提高了檢測靈敏度。由檢測結(jié)果可以看出，回收率和標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)偏差基本符合檢測要求。
在定性定量方法，傳統(tǒng)的ecd、fpd是通過化合物的保留時間定性，只能算作半定性；msd通過保留時間，標(biāo)準(zhǔn)譜庫檢索，碎片離子豐度比進(jìn)行定性，從而有效地降低了假陽性。在定量方面， msd中的選擇離子監(jiān)測（sim）方式可以在一定程度上提高化合物的檢測限。因此，該檢測方法可用于茶葉的無公害和綠色食品標(biāo)準(zhǔn)檢測。此外，所以該方法也可以用于出口茶葉的農(nóng)殘檢測中。