蝴蝶蘭的組織培養(yǎng)技術(shù)蝴蝶蘭為蘭科多年生附--生草本，又名蝶蘭，是蘭科植物中栽培最為廣泛的種類之一，主要分布在熱帶及亞熱帶地區(qū)。其花形奇特，色彩艷麗，花期持久，素有“蘭中皇后”的美譽(yù)，具有極高的觀賞和經(jīng)濟(jì)價(jià)值，在國(guó)內(nèi)外花卉市場(chǎng)上極受歡迎。蝴蝶蘭是單莖氣生蘭，植株上極少發(fā)育側(cè)枝，比其他種類的蘭花更難于進(jìn)行常規(guī)無(wú)性養(yǎng)殖。組織培養(yǎng)是建立蝴蝶蘭快速養(yǎng)殖無(wú)性系的重要手段。
1外植體的選擇
蝴蝶蘭的莖尖、莖段、葉片、花梗側(cè)芽、花梗節(jié)間、根尖等部位都已有培養(yǎng)成功的報(bào)道，方法各異，難度各有高低。蝴蝶蘭不同外植體的成活率有差異，其中花梗側(cè)芽的成活率最高，達(dá)75%；其次為花梗，成活率為62.5%；葉片和根尖最差，分別為12.5%和7.5%。針對(duì)不同外植體，取材方法也不同，通常取花梗節(jié)之間1~2cm長(zhǎng)的幼嫩部分，切取長(zhǎng)2~3mm的切段作為外植體。
2基本培養(yǎng)基的選擇
蝴蝶蘭組織培養(yǎng)所采用的基本培養(yǎng)基包括ms、1/2ms、vw、b5、kc、花寶及其改良型等，其中1/2ms對(duì)蝴蝶蘭原球莖增殖效果最好。
3外源激素的選擇
目前常使用的外源激素主要是生長(zhǎng)素類（如iaa、2,4-ｄ和naa）和細(xì)胞分裂素類（如ba、zt、kt）。蝴蝶蘭組織培養(yǎng)中常用的細(xì)胞分裂素為6-ba，較高濃度（1~8mg/l）的6-ba能促進(jìn)蝴蝶蘭原球莖增殖，較低濃度（0.1~0.5mg/l）的6-ba則能促進(jìn)原球莖分化。適宜濃度的6-ba配合較低濃度的naa，更有利于原球莖的增殖，2.0mg/l6-ba和0.3mg/lnaa配合使用是蝴蝶蘭原球莖增殖的最佳組合。
4培養(yǎng)基添加物對(duì)蝴蝶蘭增殖和分化的影響
蝴蝶蘭組織培養(yǎng)中常加入一些天然物質(zhì)如椰乳、香蕉泥、番茄汁、蘋果汁等，這些物質(zhì)能提供一些必要的微量營(yíng)養(yǎng)成分、生理活性物質(zhì)和生長(zhǎng)激素等，如加入100~200mg/l香蕉泥，具有較大的ph緩沖作用，有利于蘭科植物的壯苗和生根。許多資料也表明，添加適量的香蕉泥、椰乳或含膠質(zhì)的果菜汁等均對(duì)原球莖增殖有明顯促進(jìn)效果。
適量的添加物對(duì)蝴蝶蘭叢生芽的誘導(dǎo)和生根也有一定的促進(jìn)作用。培養(yǎng)基中添加活性炭，低濃度（0.5~1.0g/l）時(shí)對(duì)原球莖增殖影響不明顯，但可促進(jìn)蝴蝶蘭生根；高濃度（2.0~3.0g/l）時(shí)對(duì)原球莖增殖有促進(jìn)作用，但原球莖有黃化現(xiàn)象。
蔗糖作為培養(yǎng)基的能源物質(zhì)和滲透調(diào)節(jié)劑，對(duì)原球莖的增殖生長(zhǎng)影響較大。蔗糖含量為2%時(shí)，原球莖分化速度最快；蔗糖含量為2%~3%時(shí)，促進(jìn)芽的形成；蔗糖含量為5%時(shí)，有利于根的分化和生長(zhǎng)。蔗糖含量為3%~5%時(shí)，抑制原球莖的分化和生長(zhǎng)，分化質(zhì)量和分化速度都顯著下降。
5原球莖繼代中褐化的防治
蝴蝶蘭和其它蘭科植物一樣，原球莖狀體在繼代培養(yǎng)過(guò)程中易褐變死亡，不易增殖。在培養(yǎng)基中添加1~2g/l活性炭，適時(shí)切除培養(yǎng)物的褐化部分并及時(shí)更換新鮮培養(yǎng)基，能有效抑制外植體褐變死亡；培養(yǎng)基中加入10%椰子水，也能促進(jìn)原球莖的生長(zhǎng)，減少原球莖增殖過(guò)程中的褐變。蝴蝶蘭的群體效應(yīng)很明顯，單芽容易褐化死亡，且增殖較慢，因此，剛誘導(dǎo)出的原球莖狀體不能過(guò)早切割轉(zhuǎn)移，在繼代階段接種時(shí)，應(yīng)盡量避免切成單芽，增殖時(shí)切塊也不宜過(guò)小，否則容易褐化死亡。6~8月份高溫季節(jié)采芽排出的褐變物質(zhì)多，成活率也最低，所以要避免在夏季采芽。
6外界條件對(duì)蝴蝶蘭的影響
培養(yǎng)基的ph值直接影響到培養(yǎng)物對(duì)離子的吸收，過(guò)酸或過(guò)堿都對(duì)植物材料生長(zhǎng)有很大影響，此外，瓊脂培養(yǎng)基的ph還影響到凝固情況。原球莖在ph值5.0~5.4的環(huán)境中生長(zhǎng)最好，叢生芽的誘導(dǎo)與增殖在ph值5.6~5.8的環(huán)境中較好。
蝴蝶蘭在組織培養(yǎng)中，通常都以日光燈為光源，因此，可以人為地進(jìn)行控制其光照強(qiáng)弱。光照強(qiáng)度對(duì)試管苗發(fā)根和生長(zhǎng)勢(shì)均有明顯的影響。光照為3000lx對(duì)蝴蝶蘭根誘導(dǎo)和植株生長(zhǎng)有利。
在誘導(dǎo)蝴蝶蘭叢生芽過(guò)程中，由于所取的花梗芽為花芽，在培養(yǎng)過(guò)程中，較低的溫度影響（15~22℃）會(huì)使大部分花梗芽發(fā)育成花芽；在較高溫度（23~26℃）下培養(yǎng)，花?；ㄑ哭D(zhuǎn)化為營(yíng)養(yǎng)芽，所以在進(jìn)行蝴蝶蘭叢生芽誘導(dǎo)時(shí)的適宜溫度條件為（25±２）℃。
7生根壯苗及移栽
生根壯苗階段關(guān)鍵在于嚴(yán)格篩選激素的種類和濃度，一般需降低培養(yǎng)基的激素含量，以便形成健壯苗。常用的生長(zhǎng)素有iba(0.3~1.5mg/l)、naa(0.1~0.8mg/l)。添加ga30.1mg/l+naa0.1mg/l的組合能明顯提高生根率，且植株健壯，長(zhǎng)勢(shì)好。
蝴蝶蘭屬熱帶氣生蘭，具氣生根，栽培上要求根部通氣良好?，F(xiàn)在蝴蝶蘭移栽常用基質(zhì)有水苔、椰糠、蛇木、樹(shù)皮等，以水苔效果較好。
綜上所述，用組培方法快繁蝴蝶蘭較傳統(tǒng)養(yǎng)殖方法有3個(gè)明顯的優(yōu)點(diǎn)：①節(jié)省育苗用地；②節(jié)省養(yǎng)殖材料，提高養(yǎng)殖系數(shù)；③利用莖尖脫毒培養(yǎng)，挽救因受病毒侵染而退化的優(yōu)良品種，提高質(zhì)量和欣賞價(jià)值?？傊?，組培快繁技術(shù)可大大提高生產(chǎn)效益和經(jīng)濟(jì)效益。