atcc細胞傳代細胞，可根據不同細胞采取不同的方法進行細胞傳代。貼壁生長的細胞用消化法傳代，部分貼壁的細胞用直接吹打或用硅膠軟刮的刮除法傳代。懸浮細胞可采用加入等量新鮮培養(yǎng)基后直接吹打分散進行傳代，或用自然沉降法加入新培養(yǎng)基后再吹打分散進行傳代。
而這篇文章主要介紹的是貼壁細胞的傳代培養(yǎng)方法。
1、材料準備及實驗步驟
儀器：上海力康co2培養(yǎng)箱、倒置顯微鏡、上海力康安全柜
材料：corning細胞培養(yǎng)瓶、試管、移液管、巴士德吸管、廢液缸、75%酒精棉球、酒精燈、培養(yǎng)的細胞。
試劑：培養(yǎng)基rpmi1640(corning10-040-cvr)、胎牛血清、0.25%胰蛋白酶、hanks液(corning 21-020-cvr)。
實驗步驟：
① 入無菌室之前用肥皂洗手，再用75% 的酒精擦拭消毒雙手;
② 倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)，確定細胞是否傳代及細胞需要稀釋的倍數(shù)。 將培養(yǎng)用液37℃下預熱。
③ 超凈臺臺面應整潔，用75%酒精棉球擦拭清潔;
④ 打開超凈工作臺的紫外燈照射臺面20min左右，關閉紫外燈，打開風機清潔空氣除去臭氧;
⑤ 點燃酒精燈;取出無菌試管，巴士德吸管和刻度吸管;安上橡皮頭;過酒精燈火焰略燒后插在無菌試管內。
⑥ 將培養(yǎng)用液瓶口用75%酒精消毒，過酒精燈火焰后斜置于酒精燈旁的架子上。
⑦ 倒掉培養(yǎng)細胞的舊培養(yǎng)基。酌情可用2-3ml hanks液洗去殘留的就培養(yǎng)基，或用少量胰酶涮洗一下。
⑧ 每個大培養(yǎng)瓶加入1ml胰酶，小培養(yǎng)瓶用量酌減，蓋好瓶蓋后在倒置顯微鏡下觀察。當細胞收回突起變圓時立即翻轉培養(yǎng)瓶，使細胞脫離胰酶，然后將胰酶倒掉。注意勿使細胞提早脫落入消化液中。
⑨ 加入少量的含血清的新鮮培養(yǎng)基，反復吹打消化好的細胞使其脫壁并分散，再根據分傳瓶數(shù)補加一定量的含血清的新鮮培養(yǎng)基(7-10ml/大瓶;3-5ml/小瓶)制成細胞懸液，然后分裝到新培養(yǎng)瓶中。蓋好瓶蓋，適度擰緊后稍回轉，以利于co2的進入，將培養(yǎng)瓶放回co2培養(yǎng)箱。
⑩ 對懸浮培養(yǎng)細胞，步驟7-9不做。直接將細胞懸液進行離心去除舊培養(yǎng)基上清，加入新鮮培養(yǎng)基，然后分裝到各瓶中。
2、注意事項
① 傳代培養(yǎng)時注意無菌操作并防止細胞間的交叉污染。所有操作盡量靠近酒精燈火焰。每次只進行一種細胞的操作。每種細胞使用一套器材。
② 每天觀察細胞形態(tài)，掌握好細胞是否健康的標準：健康細胞的形態(tài)飽滿，折光性好，生長致密時即可傳代。
③ 如發(fā)現(xiàn)細胞有污染跡象，應立即采取措施，一般應棄置污染的細胞，如果必須挽救，可加含有抗生素的bbs或培養(yǎng)基反復清洗，隨后培養(yǎng)基中加入較大量的抗生素，并經常更換培養(yǎng)基。
3、atcc細胞的建系和維持
細胞系的維持通過換液傳代再換液、再傳代和細胞種子凍存來實現(xiàn)。
對每一個細胞系來說都有其自身的特點，要做好建系的維持必須記錄好細胞檔案,換液傳代和做好細胞系(或株)的鑒定和管理工作。
500mg behenoyl polyoxylglycerides 山崳酰氧基聚氧甘油酯標準品
500mg powdered ginger 生姜粉標準品
500mg lauroyl polyoxylglycerides 月桂酰聚氧甘油酯標準品
500mg powdered bilberry extract 越橘提取物標準品
301-00-8 5×50mg methyl linolenate 亞麻酸甲酯標準品
112-63-0 5×50mg methyl linoleate 亞油酸甲酯標準品
133107-64-9 5.97mg insulin lispro 賴脯胰島素標準品(2-8℃)
5.25oz
氟化牙粉：單氟磷酸鈉(1000 ppm)/二氧化硅標準品
5.25oz 氟化牙粉：單氟磷酸鈉(1500 ppm)/二氧化硅標準品
50-56-6 5 vials 羥可待酮標準品
9002-60-2 5 vails corticotropin 促腎上腺皮質激素標準品
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