小鼠i型膠原羧基交聯(lián)肽（ictp）試劑盒操作原理
本試劑盒用于測定小鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中i型膠原羧基交聯(lián)肽（ictp）含量。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中小鼠i型膠原羧基交聯(lián)肽（ictp）水平。用純化
的小鼠i型膠原羧基交聯(lián)肽（ictp）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中
依次加入i型膠原羧基交聯(lián)肽（ictp），再與hrp標(biāo)記的i型膠原羧基交聯(lián)肽（ictp）抗體
結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物tmb顯色。tmb在hrp
酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的i型膠
原羧基交聯(lián)肽(ictp）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（od值），通過標(biāo)準
曲線計算樣品中小鼠i型膠原羧基交聯(lián)肽（ictp）濃度。
小鼠i型膠原羧基交聯(lián)肽（ictp）試劑盒標(biāo)本要求
1．標(biāo)本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含nan3的樣品，因nan3抑制辣根過氧化物酶的（hrp）活性。
小鼠i型膠原羧基交聯(lián)肽（ictp）試劑盒操作步驟
1.標(biāo)準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
4µg/l5號標(biāo)準品150µl的原倍標(biāo)準品加入150µl標(biāo)準品稀釋液
2µg/l4號標(biāo)準品150µl的5號標(biāo)準品加入150µl標(biāo)準品稀釋液
1µg/l3號標(biāo)準品150µl的4號標(biāo)準品加入150µl標(biāo)準品稀釋液
0.5µg/l2號標(biāo)準品150µl的3號標(biāo)準品加入150µl標(biāo)準品稀釋液
0.25µg/l1號標(biāo)準品150µl的2號標(biāo)準品加入150µl標(biāo)準品稀釋液
2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準孔、
待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準品準確加樣50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl，
然后再加待測樣品10µl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此
重復(fù)5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50µl，空白孔除外。
7.溫育：操作同3。
8.洗滌：操作同5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑a50µl，再加入顯色劑b50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15分鐘.
10.終止：每孔加終止液50µl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（od值）。測定應(yīng)在加終止
液后15分鐘以內(nèi)進行。
小鼠i型膠原羧基交聯(lián)肽（ictp）試劑盒操作程序總結(jié)：
計算
以標(biāo)準物的濃度為橫坐標(biāo)，od值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準曲線，根據(jù)樣品的
od值由標(biāo)準曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準物的濃度與od值計算出標(biāo)
準曲線的直線回歸方程式，將樣品的od值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，
即為樣品的實際濃度。