1、來源:293細(xì)胞是轉(zhuǎn)染腺病毒e1a基因的人腎上皮細(xì)胞系,293t細(xì)胞由293細(xì)胞派生,同時(shí)表達(dá)sv40大t抗原,含有sv40復(fù)制起始點(diǎn)與啟動(dòng)子區(qū)的質(zhì)粒可以復(fù)制。用ca3(po4)2轉(zhuǎn)染效率可高達(dá)50%。蛋白表達(dá)水平高,轉(zhuǎn)染后2-3天用堿性磷酸酶分析可較 容易地檢測(cè)到表達(dá)的蛋白。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染293t細(xì)胞是過表達(dá)蛋白并獲得細(xì)胞內(nèi)及細(xì)胞外(分泌的或膜)蛋白的便捷方式。
2、形態(tài)為上皮細(xì)胞,貼壁細(xì)胞,能致瘤。
3、染色體核型:亞三倍體人細(xì)胞系。染色體眾數(shù)為64,30%的細(xì)胞有64 條染色體。4.2%的細(xì)胞染色體數(shù)目更多。多數(shù)細(xì)胞der(1)t(1;15) (q42;q13), der(19)t(3;19) (q12;q13), der(12)t(8;12) (q22;p13),還有四條標(biāo)記染色體,有的細(xì)胞另有5條標(biāo)記染色體。der(1)與m8 (or xq+)常常成對(duì)出現(xiàn)。n17 與 n22各有四條。值得注意的是多數(shù)細(xì)胞有三條x染色體,兩條xq+,一條xp+。
4、293細(xì)胞系是原代人胚腎細(xì)胞轉(zhuǎn)染5型腺病毒(ad 5) dna的永生化細(xì)胞。表達(dá)轉(zhuǎn)染的腺病毒5的基因。早期報(bào)道認(rèn)為此細(xì)胞含有ad 5基因組左端和右端[rf32764],現(xiàn)已清楚僅含有左端序列,此細(xì)胞系人腺病毒滴度高。室溫不貼壁,37℃幾日后重新貼壁。表達(dá)由整合素beta-1 亞基與?;Y(jié)合素受體 alpha-v 亞基組成的?;Y(jié)合素細(xì)胞表面受體。
5、293:棄培養(yǎng)基,含0.25% *, 0.03% edta 消化液洗滌,棄去,加1-2ml消化液室溫或37℃消化。加入新鮮培養(yǎng)基,吸出,分到新培養(yǎng)皿中。一傳二至一傳四。
293t:生長(zhǎng)快,通常倍增時(shí)間不到一 天 。每3~4 天1:10至1:20稀釋,5% co2條件下培養(yǎng)。細(xì)胞貼壁疏松,可只用edta消化,不要用*過度消化。
每?jī)傻饺鞊Q 液一次。
6、凍存液:95%培養(yǎng)基;5%,dmso;
7、培養(yǎng)條件:atcc培養(yǎng)基:90%的mem eagle,加入2mm l-*,1.5g/l*,0.1 mm必需氨基酸,1.0 mm 丙酮酸鈉;10%加熱滅活的馬血清37℃培養(yǎng)。