細胞培養(yǎng)自噬作為一項真核生物*的生理現(xiàn)象, 開始應(yīng)用于不同的領(lǐng)域。澳大利亞學者通過對果蠅自噬信號通路中上下游基因的敲除, 確定了自噬在果蠅程序性清除中腸中的重要作用。自噬與癌癥之間的一直是眾多學者關(guān)注的焦點, 美國學者通過在小鼠中突變自噬上游調(diào)節(jié)基因beclin1, 證實當 beclin1為雜合子時, 小鼠體內(nèi)的腫瘤增長更迅速, 過表達beclin1則會抑制腫瘤的生長。
這些研究闡明了自噬的新功能, 開辟了新的研究方向, 也給了我們將自噬運用于低溫脅迫研究的靈感。本文對自噬的特異基因lc3進行標記, 通過檢測自噬小體*的lc3ii自噬熒光點監(jiān)測自噬出現(xiàn)的時間與強度。隨后, 將hela細胞放置于不同溫度的低溫培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng), 模擬自然界中的急性冷刺激。
在這種急性冷刺激下, hela細胞出現(xiàn)了不同程度的自噬熒光點聚集, 證實了低溫可以誘導細胞產(chǎn)生自噬, 且溫度越低, 出現(xiàn)自噬的時間越早, 出現(xiàn)的自噬程度越強。結(jié)合細胞低溫下的存活率結(jié)果, 發(fā)現(xiàn)細胞自噬狀態(tài)與細胞存活狀態(tài)之間密切相關(guān), 在低溫脅迫下, 細胞先啟動自噬, 當細胞內(nèi)的自噬慢慢減弱并開始消失時, 細胞開始出現(xiàn)死亡。
為了確定在低溫脅迫下, 細胞培養(yǎng)內(nèi)自噬所擔當?shù)慕巧? 使用 bafilomycin a1阻斷了細胞自噬。自噬阻斷后, 低溫脅迫下的細胞提前開始死亡, 且細胞的存活率較未阻斷的細胞出現(xiàn)顯著性下調(diào)。這證明了細胞受到急性冷刺激時, 自噬可以保護細胞, 維持細胞的存活, 而這種保護開始減弱時, 細胞便開始死亡。
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細胞培養(yǎng)