*天：
1. 將適合菌株(如xl1-blue, dh5α)置于lb或其他營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基上，在37°c下隔夜培養(yǎng)；
2. 高溫滅菌大的離心瓶(250-500ml)以備第二天搖瓶用；
3. 準(zhǔn)備幾瓶滅菌水(總量約1.5升)，保存于冷凍室中以備第二天重懸浮細(xì)胞用；
第二天：
4. 轉(zhuǎn)移0.2-1ml隔夜培養(yǎng)物至裝有500ml lb(或其他營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基)的1-2升搖瓶；
5. 37°c下劇烈振蕩培養(yǎng)2-6小時；
6. 定時監(jiān)控od600值(培養(yǎng)1小時后每半小時測定一次；
7. 當(dāng)od600值達(dá)到0.5-1.0時，從搖床中取出搖瓶，置于冰上冷卻至少15分鐘(需要的話這種方式可以存放培養(yǎng)液數(shù)小時；
8. 細(xì)胞在4°c 5000g下離心15分鐘，棄上清液(如需要，沉淀可在4°c的10%甘油中保存一兩天)；
9. 用滅菌的冰水重懸浮細(xì)胞。先用渦旋儀或吸液管重懸浮細(xì)胞于少量體積中(幾毫升)，然后加水稀釋至離心管的2/3體積；
10. 照上面步驟重復(fù)離心，小心棄去上清液；
11. 照上面步驟用滅菌的冰水重懸浮細(xì)胞；
12. 離心，棄上清液；
13. 用20ml滅菌的、冰冷后的10%甘油重懸浮細(xì)胞；
14. 照上面步驟離心，小心棄去上清液(沉淀可能會很松散)；
15. 用10%甘油重懸浮細(xì)胞至zui終體積為2-3ml；
16. 將細(xì)胞按150μl等份裝入微量離心管，于-80°c保存。
轉(zhuǎn)化方法：
1. 在冰上解凍電感受態(tài)細(xì)胞添加1-10μl dna，冰上培育約5分鐘；
2. 添加1-3μl dna，冰上培育約5分鐘；
3. 轉(zhuǎn)移dna/細(xì)胞混合物至冷卻后的2mm電穿孔容器(無泡)中；
4. 加載p1000，準(zhǔn)備好300μl lb 或 2xyt；
5. 對電穿孔容器進(jìn)行脈沖(200 歐姆， 25μfd，2.5 千伏)(檢查時間常數(shù)，應(yīng)該在3以上)；
6. 立即添加300μl 的lb或2xyt至電穿孔容器中；
7. 37°c下培養(yǎng)細(xì)胞40分鐘至1小時以復(fù)原；
8. 轉(zhuǎn)移細(xì)胞至適當(dāng)?shù)倪x擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)。