廈門大學(xué)的老師在購買“犬促卵泡素(fsh)elisa試劑盒”的時候,選擇了上海滬鼎,為了感謝廈門老師對我司的支持,我司何副總參與了“犬促卵泡素(fsh)elisa試劑盒”實驗,祝老師實驗取得成功。
犬促卵泡素(fsh)elisa試劑盒簡介:
促卵泡素(fsh)是動物腦垂體分泌作用于卵巢卵泡生長、發(fā)育、分化、成熟和排卵的重要繁殖激素.由于是生物大分子,不能透過細胞膜,fsh必須與靶細胞膜上的促卵泡素受體(fshr)結(jié)合,經(jīng)過受體介導(dǎo)將信息傳遞到靶細胞內(nèi),才能發(fā)揮其生物學(xué)功能。所提供的elisa kit是典型的夾心法酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒(elisa)。預(yù)先包被的抗體為多克隆抗體。檢測相抗體也為多克隆抗體,經(jīng)生物素(biotin)標(biāo)記。樣品和生物素標(biāo)記抗體先后加入酶標(biāo)板孔反應(yīng)后,pbs或tbs洗滌。隨后加入過氧化物酶標(biāo)記的親和素反應(yīng);經(jīng)過pbs或tbs的*洗滌后用底物tmb顯色。tmb在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測因子呈正相關(guān)。
【犬促卵泡素(fsh)elisa試劑盒實驗操作程序】
1. 確定本次檢測所需的已包被小鼠fsh抗體的酶標(biāo)板孔數(shù)目。
2. 將倍比稀釋的小鼠fsh標(biāo)準品各0.1ml依次加入一排7孔中,1孔只加樣品稀釋液的作為對照。處理后的標(biāo)本按100ul每孔加入。
3. 酶標(biāo)板加上蓋,37℃反應(yīng)90分鐘。
4. 反應(yīng)后用自動洗板機吸去酶標(biāo)板內(nèi)的液體;或甩去酶標(biāo)板內(nèi)液體,再對著吸水紙拍幾下。洗滌2次。
5. 將準備好的生物素小鼠fsh抗體工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應(yīng)60分鐘。
6. 0.01m tbs或0.01m pbs洗滌3次,每次浸泡1分鐘左右。
7. 將準備好的abc工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應(yīng)30分鐘。
8. 0.01m tbs或0.01m pbs洗滌5次,每次浸泡1-2分鐘左右。
9. 按每孔0.1ml依次加入tmb顯色工作液,37℃避光反應(yīng),反應(yīng)過程中,要經(jīng)常的觀察,當(dāng)肉眼可見小鼠fsh標(biāo)準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色,后3-4孔差別不明顯時,即可加入tmb終止液0.1ml/孔。(顯色反應(yīng)zui長不要超過30分鐘)。
10. 用酶標(biāo)儀在450nm測定o.d.值。
11. 根據(jù)樣品的吸光值在坐標(biāo)上找出對應(yīng)的濃度。用戶也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了n倍,其實際濃度應(yīng)該×n。
【犬促卵泡素(fsh)elisa試劑盒實驗注意事項】
1. 從-20℃取出的試劑盒,在4℃解凍過夜。盒內(nèi)每一瓶解凍的溶液在開啟瓶蓋之前都要輕輕搖勻,避免解凍時出現(xiàn)的分層,否則會出現(xiàn)濃度不均一的現(xiàn)象。
2. 開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。
3. 配制各種試劑時,切記混勻!
4. 用戶在初次使用試劑盒時,應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘,以便試劑集中到管底。
5. 建議所有小鼠fsh標(biāo)準品、樣本都做雙份檢測。
6. 要嚴格避免操作過程中酶標(biāo)板干燥。干燥會使酶標(biāo)板上生物成份迅速失活!
7. 為免交叉污染,要避免重復(fù)使用手中的吸頭和試管。
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