下面我公司技術(shù)人員與大家嘮嘮百日咳桿菌(bp)核酸檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品管理的相關(guān)信息
實(shí)驗(yàn)步驟:
①產(chǎn)品僅用于科研取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的trizol試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。rna全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的trizol試劑的60%。
③rna沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無rna酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的rna,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的rna沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④rna清洗 移去上清液,每1mltrizol試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用depch2o配制),清洗rna沉淀?;靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤rna干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使rna沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解rna沉淀 溶解rna時(shí),先加入無rna酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的rna溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的te溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量rna溶液用te稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,測(cè)定rna溶液 濃度和純度。