注意：正式測(cè)定之前選擇2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。規(guī)格：100t/96s
測(cè)定意義：
微量法
血磷主要指血中的無(wú)機(jī)磷，以無(wú)機(jī)磷鹽的形式存在。血漿中鈣、磷濃度關(guān)系密切，在以 mg/dl表示時(shí)，二者的乘積(［ca］×［p］)為 30～40。當(dāng)(［ca］×［p］)>40，則鈣和磷以骨鹽形式沉積于骨組織；若(［ca］×［p］)<35 則妨礙骨的鈣化，甚至可使骨鹽溶解，影響成骨作用。血鈣和血磷含量的相對(duì)穩(wěn)定依賴于鈣、磷的吸收與排泄和鈣化及脫鈣兩種代謝的相對(duì)平衡。
測(cè)定原理：
去除血清中有機(jī)磷后，無(wú)機(jī)磷鹽與鉬酸銨試劑生成磷鉬酸，還原后呈藍(lán)色，在620nm 有光吸收；通過(guò)測(cè)定620nm吸光度，計(jì)算血液中磷含量。
自備儀器和用品：
離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、和蒸餾水。
試劑組成和配置：
試劑一：液體×1 瓶，4℃保存。試劑二：液體×1 瓶，4℃保存。
試劑三：粉劑×1 瓶，4℃保存。 臨用前配制，依次加入11ml蒸餾水充分溶解，再加入試劑二，充分混合。
標(biāo)準(zhǔn)液：液體×1 支，1mmol/l無(wú)機(jī)磷，4℃保存。
血磷濃度測(cè)定操作：
1.分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到620nm，蒸餾水調(diào)零。
2.取出標(biāo)準(zhǔn)液，室溫解凍。
3.血清預(yù)處理：吸取50μl血清，加950μl試劑一，混勻后室溫8000rpm，離心10min，取上清液，待測(cè)。
4.空白管：取微量石英比色皿/96孔板，依次加入50μl蒸餾水，50μl試劑一，100μl試劑三，混勻后靜置10min，于620nm測(cè)定吸光度，記為a空白管。
5.標(biāo)準(zhǔn)管：取微量石英比色皿/96孔板，依次加入50μl標(biāo)準(zhǔn)液，50μl試劑一，100μl試劑三，混勻后靜置10min，于620nm測(cè)定吸光度，記為a標(biāo)準(zhǔn)管。
6.測(cè)定管：取微量石英比色皿/96孔板，依次加入50μl上清液，50μl試劑一，100μl試劑三，混勻后靜置10min，于620nm測(cè)定吸光度，記為a測(cè)定管。
注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。
血磷濃度計(jì)算：
血磷含量（mmol/dl）=[c 標(biāo)準(zhǔn)液×(a 測(cè)定管－a 空白管)÷(a 標(biāo)準(zhǔn)管－a 空白管)]×樣品稀釋倍數(shù)
×v 樣總=2×(a 測(cè)定管－a 空白管)÷(a 標(biāo)準(zhǔn)管－a 空白管)
c 標(biāo)準(zhǔn)液：1 mmol/l；樣品稀釋倍數(shù)：（50μl血清+950μl試劑一）÷50μl血清=20。
注意事項(xiàng)：
1、 試劑三需臨用前配制，如未用完，4℃保存，最多可使用3天；
2、 測(cè)定過(guò)程中，應(yīng)盡量避免溶血，因?yàn)榧t細(xì)胞中有機(jī)磷酯進(jìn)入血清后可被酶水解而使得血清無(wú)機(jī)磷含量增高。
關(guān)鍵詞：離心機(jī) 移液槍 分光光度計(jì) 酶標(biāo)儀 濃度計(jì)