2015版《中國(guó)藥典》規(guī)定“*”要做指紋譜圖,要求:
1、與標(biāo)準(zhǔn)圖譜的相似度:除6號(hào)峰外,計(jì)算特征峰1?7 號(hào)與s峰的相對(duì)保留時(shí)間,其中1號(hào)峰的相對(duì)保留時(shí)間在規(guī)定值的±5%之內(nèi),其余特征峰的相對(duì)保留時(shí)間在規(guī)定值的±8%之內(nèi)。規(guī)定值為:0.58(峰1)、1.0(峰2 )、2.38 (峰3 )、2.61(峰4)、2. 65(峰5)、4. 94(峰7)。
2、4號(hào)峰與5號(hào)峰的分離度不得低于1.0。
對(duì)此,各藥企實(shí)驗(yàn)室普遍反映做出來的譜圖效果較差,不符合藥典要求。月旭科技特此驗(yàn)證本實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)采用ultimate®lp-c18色譜柱*遵從藥典方法條件下,可以符合藥典要求。
流動(dòng)相配置
流動(dòng)相a:色譜級(jí)乙腈;
流動(dòng)相b:取0.1ml的磷酸置1000ml超純水中,超聲脫氣,即得。
樣品溶液配置
對(duì)照品溶液:取(r,s)-告依春、連翹苷對(duì)照品適量,精密稱定,加70%甲醇制成濃度分別為0.02mg/ml、0.06mg/ml的混合溶液,即得;
供試品溶液:精密稱取*樣品25ml,用乙酸乙酯振搖提取6次,每次25ml,合并乙酸乙酯液,蒸干,殘?jiān)?0%甲醇溶解,置10ml量瓶中,加70%甲醇至刻度,搖勻,即得。
色譜條件
色譜柱:月旭 ultimate®lp-c18(4.6×250mm,5μm)
流動(dòng)相洗脫程序:
柱溫:30℃
檢測(cè)波長(zhǎng):236nm
流速:1.0ml/min
進(jìn)樣體積:10μl
實(shí)驗(yàn)圖譜
1)對(duì)照溶液
2)樣品
3)供試品放大圖
結(jié)論:
相對(duì)保留時(shí)間均在藥典規(guī)定范圍內(nèi);
峰4與峰5的分離度為1.34,可以達(dá)到藥典要求的1.0要求。