不同元素在細(xì)胞中的作用，是目前細(xì)胞生物學(xué)中前沿的研究領(lǐng)域之一。在相關(guān)的研究當(dāng)中，如果能在一次分析中得到單個(gè)細(xì)胞中的多個(gè)元素的信息，將會(huì)在提高實(shí)驗(yàn)效率的同時(shí)，也為研究人員提供更多的研究空間。本期向您介紹高靈敏度、多元素的單細(xì)胞分析方案，為幫助您檢測(cè)單個(gè)細(xì)胞中的阿克 (ag, 1.0 × 10-18g) 級(jí)的多種元素。
使用agilent 7900 icp-ms
在 scicp-ms 模式下進(jìn)行單細(xì)胞分析
僅使用 100 μl 樣品測(cè)量單細(xì)胞中的四種元素
許多元素對(duì)細(xì)胞健康至關(guān)重要，元素不平衡、缺乏或過(guò)量都可能會(huì)破壞自然細(xì)胞過(guò)程。傳統(tǒng)細(xì)胞中金屬元素的分析方法需要進(jìn)行樣品溶解、提取或消解，然后利用原子光譜進(jìn)行分析。這些樣品前處理步驟會(huì)破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，使得報(bào)告中的金屬濃度結(jié)果為數(shù)千個(gè)細(xì)胞的平均值。
在單細(xì)胞 icp-ms (scicp-ms) 中，樣品溶液中包含的完整細(xì)胞被霧化，各個(gè)細(xì)胞懸浮在氣溶膠液滴中。之后，使用成熟的單納米顆粒 icp-ms (spicp-ms) 分析方法將各個(gè)細(xì)胞引入等離子體中，即可對(duì)單細(xì)胞中的金屬元素進(jìn)行有效分析。
實(shí)驗(yàn)部分
本實(shí)驗(yàn)使用水溶液配制酵母細(xì)胞樣品，采用配備可選的集成樣品引入系統(tǒng) (isis 3) 的 agilent 7900 icp-ms 進(jìn)行分析，利用 agilent icp-ms masshunter 軟件的單納米顆粒應(yīng)用模塊的快速多元素納米顆粒分析模式進(jìn)行方法設(shè)置、采集和數(shù)據(jù)處理。
結(jié)果與討論
- 細(xì)胞霧化和傳輸效率
為確定細(xì)胞傳輸效率，將 icp-ms 計(jì)算得出的細(xì)胞數(shù)量除以通過(guò)顯微鏡計(jì)數(shù)得出的細(xì)胞數(shù)量。使用此方法，得出細(xì)胞傳輸效率為 25%。確保大量細(xì)胞得到霧化和分析，可提高數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確度。
- 信號(hào)分布
使用 scicp-ms 在多元素模式下分析單細(xì)胞。31p+、34s+、56fe+和66zn+的信號(hào)分布如圖 1 所示。通過(guò)在樣品前處理程序的離心和緩沖液置換步驟中充分清洗細(xì)胞，可以明確區(qū)分單細(xì)胞中各種元素的信號(hào)與背景信號(hào)。
圖 1. 單細(xì)胞中四種分析物的信號(hào)分布
- 平均質(zhì)量
表 1 所示的 p、s、fe 和 zn 的平均質(zhì)量數(shù)據(jù)由 icp-ms masshunter 軟件自動(dòng)計(jì)算得出。除核酸和蛋白質(zhì)的主要成分 p 和 s 以外，還測(cè)量了各個(gè)細(xì)胞中亞飛克 (fg, 1.0 × 10-15g) 級(jí)的 fe 和 zn。
表 1. 單細(xì)胞中各種分析物的平均質(zhì)量（阿克）和精密度 (n = 3)
結(jié)論
安捷倫多元素 scicp-ms 方法能夠用于詳細(xì)測(cè)量和研究多種金屬在細(xì)胞生物學(xué)中的作用。該技術(shù)提供了有關(guān)單個(gè)細(xì)胞中固有金屬含量和金屬締合物的有價(jià)值的信息。scicp-ms 還可用于研究細(xì)胞對(duì)金屬和含金屬納米顆粒的吸收、累積和釋放。