液相色譜儀的分離是在色譜分離柱中實現(xiàn)的。我們目前工作中多采用反相色譜柱,如何保護好分離柱減少柱的污染是延長柱壽命的關鍵。
1維護好色譜分離柱的方法
加保護柱(預柱)是保護分離柱的有效辦法。保護柱是根內(nèi)裝填料與分離柱性質(zhì)相近的短柱,接在分離柱之前,或代替流路過濾器。保護柱的作用是收集和阻塞分離柱口的化學垃圾,這些垃圾如果直接進入分離柱會逐漸堆積在柱頭,zui終降低柱效能。
避免高壓沖擊分離柱。一般色譜柱都能承受得起高壓,但經(jīng)不住突然變化的高壓沖擊,這將改變柱床體積,影響柱效。
合理選擇分離柱。我們知道,選擇色譜分離柱主要根據(jù)兩點,一是根據(jù)待測組分的分子量的大?。欢歉鶕?jù)流動相條件,包括ph值、離子強度和溶劑極性等。
定期沖洗分離柱。每次分析工作結(jié)束時,沖洗完緩沖鹽后,zui后要過度到用強溶劑沖洗柱子,如可用色譜純甲醇、乙腈沖洗反相c18柱,目的是沖去吸附在柱上的強保留組分。如果用甲醇/水為流動相也應這樣沖洗柱子,在一定程度上可恢復柱效。
2減少柱的污染的方法
zui有效的辦法是純化樣品。我們在多年的分析工作中發(fā)現(xiàn),凡是樣品純化的越干凈,分離柱的壽命就越長;反之,只有提取沒有純化的樣品,分離柱柱效下降較快。建立一個理想的色譜分析方法應該有一套有效的樣品前處理方法,特別是在分析血漿和尿液樣品時,要特別注意樣品的提取與純化,盡量使處理過的樣品中雜質(zhì)降到zui低,保護柱頭和柱子。
提取純化好的樣品用流動相來溶解,一方面減少色譜圖中的溶劑峰干擾,另一方面也是檢查樣品在流動相中的溶解性,如果樣品進樣后在流動相中沉淀,會堵塞進樣器和柱頭,甚至樣品分解,出現(xiàn)怪峰。如果出現(xiàn)樣品與流動相不溶要設法改變?nèi)芙鈼l件,如更換樣品溶劑,或改進處理樣品的方法,或過濾,去除不溶性物質(zhì)。
關鍵詞:液相色譜儀 色譜柱