1 材料
mastercyclerpcｒ 儀 ( 德 國 eppendorf公司) ; powerpac3000 電 泳 儀 ( 美 國 bio-ｒad 公司) ; iontorrent 高通量測序平臺、pico-21 臺式離心機 ( 美國 thermo fisher 公司) ; gl-88b 漩渦混合器 ( 海門其林貝爾儀器制造有限公司) 。采用 ctab 法分別提取酒曲與酒糟中微生物基因組 dna。具體步驟為樣品預處理，ctab 法 提 取 緩 沖 液，采 用 tris酚、氯仿、異戊醇抽提，異丙醇沉淀，70%乙醇洗滌，dna 溶解及 ｒna 酶酶解等。再用 1%瓊脂糖凝膠電泳檢測 dna 純度和濃度，－20 ℃保存?zhèn)溆?。?用 引 物( 341f、806ｒ) 和 引 物 ( its1f、its2ｒ) 分 別 對細菌 16s rdna 的 v3-v4 區(qū)和真菌內(nèi)源轉錄間隔its1 區(qū)進行 pcｒ 擴增，產(chǎn)物使用 2%瓊脂糖凝膠進行電泳檢測回收，并用 genejet 膠回收試劑盒純化，利用單端測序的方法，構建小片段文庫，構建好的文庫經(jīng)過 qubit 定量和文庫檢測合格后，再采用 ions5tm xl 測序平臺進行上機測序 ( 北京諾禾致源科技股份有限公司) 。
2 方法與結果
另有未 得 到 分 類 學 注 釋 的 菌 群 豐 度 值 為8%，其他真菌菌門豐度值小于 1%。相對于酒曲，酒糟中細菌在門分類水平上還包括相對豐度值較大的放線菌門和藍細菌門，并有未得到分類學注釋的菌群; 而真菌群中兩者在門分類水平上種 類 差 異 較 小，但各菌門的相對豐度值差異較大。由于高通量測序技術分析酒曲與酒糟檢測出大量微生物，多數(shù)菌群相對豐度值較低，為方便直觀查看，擬選擇在屬水平上的優(yōu)勢菌屬 ( 豐度≥1. 0%) 進行統(tǒng)計，其他 菌 門 ( 豐 度 ＜ 1. 0%) 同 樣 歸 納 為 其 他( others)。也可能是宜賓地區(qū)酒曲*的微生物體系，這與當?shù)氐闹魄赜蛐蕴厣芮邢嚓P。而對于酒曲和酒糟間存在微生物體系的較大差異性，則可能與廠家發(fā)酵生產(chǎn)白酒的環(huán)境 ( 原料、用水、空氣、窖池等) 及樣品的加工與儲存環(huán)境相關。
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