化學(xué)防曬霜配方中含有紫外線 (uv) 過濾化合物，可預(yù)防皮膚曬傷和 dna 損傷。本 應(yīng)用簡報開發(fā)并驗證了一種對樣品進行前處理，然后對防曬產(chǎn)品中的活性 uv 過濾 劑成分進行定量分析的可靠方法。在進行 hplc 分析前，采用有機萃取，然后通過 膜過濾，從防曬乳液中提取活性成分。雖然參比標準分析物的保留時間重現(xiàn)性佳 (%rsd ≤ 0.11)，但在色譜柱上連續(xù)進樣防曬霜樣品時，觀察到嚴重的保留時間漂 移、基線漂移和峰形不規(guī)則。使用 agilentcaptiva emr-lipid 色譜柱解決了色譜問 題，去除了提取樣品中的基質(zhì)脂質(zhì)。結(jié)果實現(xiàn)了可接受的定量準確度和回收率水平 (95%–103.5%)，提高了連續(xù)進樣 7 種非處方防曬產(chǎn)品中所有紫外線過濾劑保留時間 的一致性。
化學(xué)防曬產(chǎn)品中的活性成分是 fda 批準 的芳香族化合物，在紫外線范圍內(nèi)具有較 高摩爾吸收率。這些紫外線過濾化合物與 保濕劑、乳化劑和增稠劑結(jié)合在一起，可 制得穩(wěn)定配方，其中的活性成分可用于保 護皮膚免受紫外線輻射。
需要進行定量分析測試，以確保非處方 (otc) 防曬產(chǎn)品能提供廣譜保護且滿足美 國聯(lián)邦法規(guī)要求[1]。防曬霜配方復(fù)雜基質(zhì) 和活性成分的紫外線吸收率使 hplc 成為 當前方法，以確保產(chǎn)品一致性和質(zhì) 量。但是，這些產(chǎn)品中存在的基質(zhì)脂質(zhì)會 導(dǎo)致色譜重現(xiàn)性較差，從而造成色譜柱污 染以及方法準確度和精密度不可靠。本應(yīng) 用簡報討論了一種簡單的樣品前處理技 術(shù)，可在使用 captiva emr-lipid 色譜柱 分析防曬產(chǎn)品時提高色譜重現(xiàn)性并延長色 譜柱壽命。
試劑與標準品 hplc 級水、hplc 級異丙醇 (ipa) 和 5 種 fda 批準的紫外線過濾劑（通常用 于配制防曬霜[2]）的 usp 參比標樣購自 sigma-aldrich（表1）?；旌厦糠N參比標 樣 10 mg，將其溶解在 ipa 中，使每種化 合物的終濃度達到 2 mg/ml，制得標 準混合儲備液。該儲備液作為高校準濃 度水平（5 級），還配制了四個連續(xù)稀釋的儲備液用作中間校準濃度，其中每種化 合物濃度為 1（4 級）、0.5（3 級）、0.25 （2 級）以及 0.125 mg/ml（1 級）。
消耗品 以下消耗品用于樣品前處理： • 15ml 離心管（celltreat 部件號 229412） • agilent 6 ml captiva emr-lipid 過濾柱 （部件號5190-1004） • 10 ml norm-ject luer slip 進樣針 （henke sass wolf 部件號 4100-000v0） • 安捷倫接頭：1、3、6 ml（部件號 12131001） • 安捷倫優(yōu)級 0.2µm 玻璃纖維/尼龍針 頭過濾器（部件號 5190-5132）• 安捷倫 2 ml 棕色螺口蓋樣品瓶（部 件號5182-0716） • 安捷倫螺口蓋 ptfe/紅色硅膠隔墊 （部件號 5190-7024）
從個人護理產(chǎn)品中提取和凈化紫外線過 濾劑 用分析天平將 100 mg 防曬霜或潤唇膏直 接稱入 15 ml 離心管中。開始提取時，將 2 ml 熱水（85 至 95 °c）加入試管中， 將樣品劇烈振搖并渦旋混合 2 分鐘。將 10 ml ipa 等分試樣加入試管中，再次渦 旋混合 2分鐘，然后超聲處理 10 分鐘。 為促進進一步溶劑化和分散，將樣品以相 同方式再次進行渦旋混合和超聲處理。為促進液相和固相的分離，將樣品在 2500 rpm 下離心 15 分鐘。棄去沉淀塊并將一半左右的上清液小心轉(zhuǎn)移到 6 ml agilentcaptiva emr-lipid 過濾柱中。 將接頭塞蓋在過濾柱頂部，并用 10 ml luer slip 進樣針對樣品施加正壓。樣品混 合物以每滴 3–5 秒的流速低壓通過過濾 柱。將洗脫液收集到潔凈的 15 ml 錐形 離心管中。在前半部分流過后，將其余樣 品轉(zhuǎn)移到 emr 過濾柱中。采用安捷倫優(yōu) 級 0.2µm 玻璃纖維/尼龍針頭過濾器過濾 樣品去除顆粒，直接加入至 2 ml 棕色玻 璃樣品瓶中。
儀器配置：本分析使用由 agilent chemstation 軟件 （版本 c.01.09）控制并配備四元泵、 真空脫氣機、自動進樣器、色譜柱熱 交換器和二極管陣列檢測器 (dad) 的 agilent1260 infinity ii 液相色譜系統(tǒng)。使 用 agilentinfinitylab poroshell 120 ec-c18 色譜柱 (3.0 mm × 50 mm, 2.7µm) 和 infinitylab poroshell 120 ec-c18 保護 柱 (2.1 mm × 5 mm, 2.7µm) 進行色譜分 離。進樣量為 1 µl，進樣之間用 ipa 清 洗針頭 3 次。用于分析物分離的等度流 動相、流速和柱溫箱為安捷倫專有。dad 在 238 nm 波長下用于數(shù)據(jù)采集。分析停 止時間為 11 分鐘。每次樣品分析后均運 行不進樣的空白，在該過程中，用 95% ipa 沖洗色譜柱，并在下一次進樣前用流 動相重新平衡。
結(jié)果與討論：標準品的系統(tǒng)適用性 該方法對參比混標實現(xiàn)了出色的基線分離 度，如圖 1 所示。在 0.78 分鐘處觀察到 的負峰是進樣的假陽性結(jié)果。如先前的報 道，在 1.92 分鐘處觀察到的峰是阿伏苯 宗標準品中的雜質(zhì)[3]。在 4.92 至 9.87 分 鐘之間觀察到的六個主要峰是按洗脫順序 鑒定的標準品分析物：保留時間、峰寬（半峰高）、峰對稱性、 usp 拖尾因子和分離度值證實了參比混標 中六種成分出色的基線分離度（表2）。 圖 2 為混標的六次重復(fù)進樣色譜圖。該方 法提供了出色的保留時間重現(xiàn)性，所有六 個參比標樣峰的 rsd% 介于 0.06–0.11， 峰面積 rsd < 0.41%。