想快速區(qū)分不同胰蛋白酶？這三點(diǎn)是關(guān)鍵！
胰蛋白酶大致可以分為兩種，一種是傳統(tǒng)使用的動物源性的胰蛋白酶，普遍發(fā)現(xiàn)于脊椎動物消化系統(tǒng)，直接提取自?；蜇i的胰腺組織；另一種則是非動物源性胰蛋白酶，即利用基因重組技術(shù)生產(chǎn)的重組胰蛋白酶。01應(yīng)用區(qū)別
胰蛋白酶
理化性質(zhì)
胰蛋白酶是從牛、豬、羊的胰臟提取，通過多重結(jié)晶方式純化，并進(jìn)一步采取層析及超濾技術(shù)制備而得。該酶易溶于水，不溶于、乙醇、等有機(jī)溶劑。在ph1.8時，酶短時間煮沸幾乎不失活，在堿溶液中加熱則會變性沉淀。ca2+對酶有保護(hù)和激活作用，胰蛋白酶的等電點(diǎn)為ph10.1。胰蛋白酶作為肽鏈內(nèi)切酶，對精氨酸和賴氨酸肽鏈具有選擇性水解作用。早期的胰蛋白酶在生物制藥領(lǐng)域的主要應(yīng)用是胰島素的生產(chǎn)，很快也在其他細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域應(yīng)用起來。動物胰酶普遍用于血清培養(yǎng)，不同細(xì)胞加入的酶濃度不一樣。
應(yīng)用范圍
胰島素、滅活疫苗生產(chǎn)
組織細(xì)胞分離及培養(yǎng)
臨床外科使用
食品行業(yè)加工助劑
重組胰蛋白酶
理化性質(zhì)
重組胰蛋白酶是一種使用基因工程技術(shù)生產(chǎn)的酶，具有穩(wěn)定性好、純度高、無動物來源的優(yōu)點(diǎn)。市場主流的重組胰蛋白酶是利用dna重組技術(shù)在大腸桿菌或酵母中表達(dá)的重組豬胰蛋白酶，其氨基酸序列與豬胰蛋白酶一致，具有與天然胰蛋白酶相同的活性和特異性。其由223個氨基酸構(gòu)成，含有6對二硫鍵。該酶包含兩種胰蛋白酶活性形式：α-胰蛋白酶和β-胰蛋白酶。其活性受絲氨酸蛋白酶抑制劑如pmsf和tlck等、金屬離子螯合劑如edta等的抑制。重組胰酶用于無血清培養(yǎng)，同胰蛋白酶一樣，不同細(xì)胞加入的酶濃度不一樣。
應(yīng)用范圍
疫苗和重組胰島素生產(chǎn)
細(xì)胞分析的組織樣本制備
免疫細(xì)胞治療
生物藥物生產(chǎn)
蛋白質(zhì)序列、結(jié)構(gòu)及組學(xué)研究
02質(zhì)量要求區(qū)別
分類
胰蛋白酶
重組胰蛋白酶
重組胰蛋白酶（質(zhì)譜級）
來源
取自牛、豬、羊的胰臟
大腸桿菌或酵母重組表達(dá)
畢赤酵母重組表達(dá)
安全性
潛在病原污染
無外源性病毒污染
無外源性病毒污染
純度
1：250胰蛋白酶溶液中90%以上為雜質(zhì)
高純度（β-trypsin≥70%，
α-trypsin≤20%）
高純度（β-trypsin>80%，
α-trypsin<20%）
糜蛋白酶
每2500單位胰蛋白酶中不得多于50單位的糜蛋白酶。
無糜蛋白酶等雜酶污染
無糜蛋白酶等雜酶污染
比活
/
≥3800usp units/mg 蛋白
>6800uspunits/mg蛋白
消化效果
不穩(wěn)定
消化能力強(qiáng)，酶用量少
消化能力強(qiáng)，酶用量少
自切率
容易自切產(chǎn)生自身自切片段影響質(zhì)譜分析結(jié)果
容易自切產(chǎn)生自身自切片段影響質(zhì)譜分析結(jié)果
經(jīng)過特殊處理保證其不自切
同時，藥典級別的重組胰蛋白酶要求微生物的菌落總數(shù)不超過100cfu/ml，宿主蛋白質(zhì)殘留量不超過0.01%，外源性dna殘留量不超過10ng/mg。由上表可以看出，相比傳統(tǒng)動物源提取的胰蛋白酶，重組胰蛋白酶在活性、純度以及無動物源性等方面優(yōu)勢更為明顯，更符合生物制藥行業(yè)發(fā)展趨勢。在國家政策層面上，2019年9月國家藥監(jiān)局發(fā)布的《疫苗上市后生產(chǎn)工藝變更研究技術(shù)指導(dǎo)原則》(征求意見稿)指出，在疫苗生產(chǎn)過程中，鼓勵企業(yè)進(jìn)行無動物源原輔料的變更，應(yīng)盡可能避免使用人源或動物源性原材料。2020年版《中國藥典》增加了重組胰蛋白酶標(biāo)準(zhǔn)，推動我國非動物源性生物藥物的研發(fā)，因此重組胰蛋白酶已逐漸成為更高標(biāo)準(zhǔn)、更高要求的生物制藥。翌圣生物在重組胰蛋白酶領(lǐng)域不斷創(chuàng)新，不僅推出滿足2020版中國藥典要求的重組胰蛋白酶，最新推出的重組胰蛋白酶（質(zhì)譜級）活性更高，優(yōu)于進(jìn)口同類產(chǎn)品，其中β-trypsin的hplc含量可達(dá)80%以上（高于2020版中國藥典標(biāo)準(zhǔn)≥70%），儲存穩(wěn)定性高，蛋白質(zhì)組學(xué)酶解漏切率比進(jìn)口產(chǎn)品低50%。
03細(xì)胞分離及基因表達(dá)水平區(qū)別maarof manira[1]等人研究了不同胰酶對皮膚細(xì)胞培養(yǎng)的影響。在這項研究中，全層人皮膚經(jīng)過膠原酶消化后釋放成纖維細(xì)胞，分別使用胰蛋白酶edta溶液（te）和重組胰蛋白酶溶液（ts）處理細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)在細(xì)胞的培養(yǎng)擴(kuò)增過程中，用te或ts處理的人角質(zhì)形成細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的總細(xì)胞產(chǎn)量相當(dāng)（見圖1）；通過定量rt- pcr和免疫細(xì)胞化學(xué)方法（icc）分析te和ts對i型膠原（col-i）、iii型膠原（col-iii）、細(xì)胞角蛋白10（ck10）和細(xì)胞角蛋白14（ck14）的基因和蛋白表達(dá)水平影響，發(fā)現(xiàn)與te相比，ts除col-iii外的皮膚特異性基因表達(dá)更高，蛋白表達(dá)水平相似（見圖2,4）。研究數(shù)據(jù)反饋，重組胰蛋白酶（ts）表現(xiàn)出更溫和的消化效果，能夠保持高細(xì)胞活力和細(xì)胞產(chǎn)量。
04產(chǎn)品列表產(chǎn)品名稱
貨號
規(guī)格
perfcell™ trypsin-edta (0.25%), phenol red 胰酶-edta溶液（0.25%），無酚紅
40123es60
100 ml
perfcell™ trypsin-no edta (0.25%), no phenol red 胰酶-無edta溶液（0.25%），無酚紅
40124es60
100 ml
perfcell™ trypsin (0.25%), phenol red 胰酶溶液（0.25%），含酚紅
40126es60
100 ml
perfcell™ trypsin-edta (0.25%), phenol red 胰酶-edta溶液（0.25%），含酚紅
40127es60
100 ml
trypsin 1:250(powder) 胰蛋白酶1:250(粉末)
40101es25
25 g
perfcell™ recombinant trypsin（powder）重組胰蛋白酶（粉末）
40512es10/60
10 mg/100 mg
recombinant trypsin（ms-safe）重組胰蛋白酶（質(zhì)譜級）
20416es60
100 µg
perfcell tryzyme™express 酶 (1x)，含酚紅
40134es60
100 ml
perfcell tryzyme™express 酶 (1x)，無酚紅
40135es60
100 ml
參考文獻(xiàn)：
[1]manira m,khairul anuar k,seet wt,ahmad irfan aw,ng mh,chua kh,mohd heikal my,aminuddin bs,ruszymah bh.comparison of the effects between animal-derived trypsin and recombinant trypsin on human skin cells proliferation,gene and protein expression.cell tissue bank.2014 mar;15(1):41-9.