1叢生芽誘導
這一階段主要是誘導芽，在外植體初代培養(yǎng)8-10d．部分外植體芽開始膨大。14d后相繼出現(xiàn)新芽；培養(yǎng)24d后新芽可長至2．0~3．8cm，生長情況見表l。
從表l可以看出。ⅱ、ⅳ這三個處理均有較高的出芽率．其中以處理ⅱ即ms+6一ba0．5+naa0．1芽萌發(fā)情況最好．芽粗壯．葉大且舒展．平均伸長3．5cm；處理i不添加生長調節(jié)物質，長勢較整齊，但芽的萌發(fā)較慢，新芽葉片小且蜷縮．平均伸長1．5cm;處理ⅲ芽萌發(fā)情況不好，玻璃化情況嚴重。處理ⅳ芽萌發(fā)情況亦可，平均伸長2．7cm，但葉片小，不舒展，長勢較弱。因此，ⅳ雖有較高的出芽率，但新芽長勢不好。不適宜作為繼代材料使用。處理ⅱ既有較高的出芽率且新芽長勢又好，是較適宜的初代培養(yǎng)基。
2芽分化誘導培養(yǎng)
芽分化增殖過程是夜香樹離體快速繁殖培養(yǎng)過程中一個非常重要的環(huán)節(jié)。獲得無菌材料后，是否能順利進入快速增殖培養(yǎng)階段。篩選出符合要求分化增殖培養(yǎng)基是此階段的主要任務．對于離體快速繁殖最終是否能應用于生產時間．受兩個關鍵因素制約：(l）芽的增殖率、芽的增殖速度是離體快速繁殖中的重要環(huán)節(jié)，直接關系到能否商業(yè)化生產；(2）有效芽所占比例，指可作為繼代材料或生根材料的芽占全部芽的百分率。此時芽的質量決定了芽的利用率的高低，所以選擇一個增殖率高且有效芽多的增殖培養(yǎng)基是離體快速繁殖的關鍵。
將第一階段培養(yǎng)成功的芽切下，接種于分化增殖培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基以ms為基本培養(yǎng)基，6一ba、iba分別設了5個梯度，共50個處理，培養(yǎng)25d。對生長情況（表2）分析可知，芽增殖用6-bao.5mg/l、ibao.2mg/l時，芽增殖倍數(shù)為7.5，芽苗生長正常，節(jié)間略長，但有利于繼代繁殖。所以確定選取增殖倍數(shù)在5一6的分化增殖培養(yǎng)基，既符合增殖效果又符合得到健壯有效苗雙重標準的處理為6-ba0.4~0.5mg/l，ibao.2一0.3mg/l。
3生根培養(yǎng)
由表3分析可知，經過30d的生根培養(yǎng)，不同濃度iba對夜香樹生根率、生根數(shù)均有不同程度的影響，其中以ibao.3mg/l時生根情況最好，生根率高，發(fā)根早。有4一5條側生根。當ibao.5mg/l時發(fā)現(xiàn)，有些根生長在植株基部愈傷組織上，根粗壯，側根多，但從苗瓶中取出移栽時根容易脫落，成活率不高。實驗還表明，夜香樹生根快慢與生根質量不僅受培養(yǎng)基的影響，而且與生根材料的健壯程度與木質化程度有密切關系。粗壯、半木質化材料生根快，主根與側生根發(fā)育好（表3）。
4煉苗與移栽
夜香樹試管苗在組培室內濕度比較恒定、無菌條件下產生出來的，因此，沒有經過抗冷、抗熱、抗早或抗病等因素的煉苗，當移栽、種植到小棚或溫室栽培后往往會受到各種不利因素的影響，所以，在種植后7d應及時噴灑殺菌劑，每隔7一10d噴1次。常用殺菌劑有多菌靈、瑞毒素、波爾多液，濃度掌握在l000~1500倍為宜。
生根培養(yǎng)28d后，當瓶內組培苗長到scm左右時，將生根的瓶苗移人自然光下光培養(yǎng)7d后揭膜。為減少取苗時對根系的傷害，在拔苗前適當往瓶中加人一些自來水浸泡l一2h，將苗拔出后用自來水沖去附著的根部的瓊脂，移栽到用蒸汽消毒過的細煤渣或細沙中，成活率可達92腸以上。在煉苗床上培養(yǎng)15~20d移人大田或容器中。
苗期管理
移植后每天淋水兩次，淋水時注意不要用膠管或噴槍直射、直淋，最好用噴霧方式淋水。因為試管苗幼小，直射、直淋都會造成植株歪斜。生長初期7d噴施氮肥兩次，21d后加少許磷、鉀肥，棍合施用。花后將枯枝和過密枝條剪除．對徒長進行截短處理。常見病害有輪紋病，可用50％甲基托布津可濕性粉劑500倍液噴灑。蟲害有介殼蟲和粉虱，用50％殺螟松乳油1000倍液噴殺。
結論
ms+6-bao.5mg/l+naa0.lmg/l＋蔗糖3.0%＋瓊脂0.6％是夜香樹較為理想的誘導芽萌發(fā)的培養(yǎng)基；芽增殖培養(yǎng)基為ms+6-ba0.5mg/l，iba0.2mg/l＋蔗糖3%＋瓊脂0.6%，繼代培養(yǎng)25d增殖系數(shù)可達7.5，且生長健壯。
在1/2ms+ibao.3mg/l十蔗糖0.15％十瓊脂0.6％的培養(yǎng)基上，夜香樹生根效果較好，生根率達到100%，平均根數(shù)為5.7。在夜香樹移栽煉苗的過程中要嚴格控制空氣相對濕度，實驗過程中發(fā)現(xiàn)夜香樹瓶苗極易失水皺縮，煉苗前10d空氣相對濕度都應該保持在80％以上，最好是通過扣玻璃瓶或塑料薄膜來保持濕度。
夜香樹的花香過于濃郁，近距離聞其香氣易使人引起頭暈或不舒服的感覺。故只可在公園或庭院的空曠處種植，且數(shù)量不宜過多過密。
討論
在試管苗生根培養(yǎng)中，耗費了大量的時間和培養(yǎng)空間，而采用試管苗瓶外生根不僅可以減少一次無菌操作的步驟，提高了培養(yǎng)空間，又簡化了組織培養(yǎng)程序，降低了生產成本，提高了繁殖系數(shù)，能進一步解決工廠化育苗的難題。因此是一項值得研究的技術之一。