rna是目前發(fā)現(xiàn)細胞內(nèi)生物功能zui豐富多樣的生物大分子，同時是dna與蛋白質(zhì)信息傳遞的橋梁，因此完整rna的提取和純化是功能基因組時代的重要手段，那么你知道rna提取的實驗步驟是什么嗎？讓我們一起來看看吧！
以trizol法提取組織細胞為例：
1.提取細胞rna時，先離心沉淀細胞，每5~106個細胞加1ml trizol后，反復(fù)用槍吹打或劇烈震蕩以裂解細胞；
2.將上述組織或細胞的trizol裂解液轉(zhuǎn)入ep管中，在室溫15~30℃下放置5分鐘；
3.在上述ep管中，按照每1ml trizol后加0.2ml氯仿的量加入氯仿，蓋上ep管蓋子，在手中用力震蕩15秒，在室溫下（15~30℃）放置2~3分鐘后，12000g（2~8℃）離心15分鐘；
4.去上層水相置于新ep管中，按照每1ml trizol加0.5ml異丙醇的量加入異丙醇，在室溫下（15~30℃）放置10分鐘后，12000g（2~8℃）離心10分鐘；
5.棄上清，按照每1ml trizol加1ml 75% 乙醇進行洗滌，渦旋混合，7500g（2~8℃）離心5分鐘，棄上清；
6.讓沉淀的rna在室溫在自然干燥；
7.用rnase-free water 溶解rna沉淀。
8.rna檢測
(1) rna的電泳圖譜，電泳的目的是在于檢測28s、18s、5s條帶的完整性和他們的比值，一般的，如果28s和18s條帶明亮、清晰、條帶銳利，并且28s的亮度在18s條帶的兩倍以上，我們認為rna的質(zhì)量是好的。
(2) 測定樣品在260nm和280nm的吸光值按1od=40μg/ml rna計算rna的產(chǎn)量，一般的od260/od280在1.8-2.0范圍，我們認為rna的質(zhì)量是好的，如果r<1.8，說明溶液中蛋白或者時其他有機物的污染比較明顯，如果r>2.2，說明rna已經(jīng)水解成單核酸了。
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