實(shí)驗(yàn)一：細(xì)胞增殖分析
1）制備細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)。2）在96孔板中接種細(xì)胞懸液，每孔約100μl，同樣的樣本可做3個(gè)重復(fù)。3）將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)一段時(shí)間（37℃, 5%co2），細(xì)胞貼壁需要大約2-4h，如果是懸浮細(xì)胞，該步驟可以省去。4）每孔各加入10μl cck-8溶液，由于加入的cck-8量比較少，可能會(huì)因試劑沾在孔壁上而帶來誤差，建議在加完試劑后輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)板以幫助混勻，或者直接配置含10%cck-8的培養(yǎng)基，以換液的形式加入。另外注意，加樣的過程中盡量不要產(chǎn)生氣泡。5）將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱中孵育1-4h。因?yàn)榧?xì)胞種類不同，形成的formazan的量也不一樣，所以如果顯色不夠的話，可以延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間，特別是血液細(xì)胞形成的formazan很少，需要較長(zhǎng)的顯色時(shí)間（5-6h）。6）酶標(biāo)儀測(cè)定450nm處的吸光值（od）。7）若暫時(shí)不測(cè)定od值，可以在各孔中加入10μl 0.1 m的hcl溶液或者1% w/v sds溶液，室溫下避光保存，這樣可以保證od值在24h內(nèi)不發(fā)生變化。
實(shí)驗(yàn)二：細(xì)胞毒性分析
1）制備細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)。2）在96孔板中接種細(xì)胞懸液，每孔約100μl，同樣的樣本可做3個(gè)重復(fù)。3）將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)一段時(shí)間（37℃, 5%co2），細(xì)胞貼壁需要大約2-4h，如果是懸浮細(xì)胞，該步驟可以省去。4）向培養(yǎng)板各孔中加入不同濃度的毒性物質(zhì)（藥物、化學(xué)試劑等待檢測(cè)物質(zhì)）。5）將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱中孵育一段時(shí)間，例如6、12、24、48h，具體時(shí)間要看待測(cè)物質(zhì)的性質(zhì)和細(xì)胞的敏感性。如果待檢測(cè)物質(zhì)有氧化性或還原性，可在加入cck-8之前更換新鮮培養(yǎng)基，以去掉待測(cè)物質(zhì)的影響。如果影響比較小或者沒有影響，可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入藥物后的空白吸收即可。6）向每孔中加入10μl cck-8溶液，由于加入的cck-8量比較少，可能會(huì)因試劑沾在孔壁上而帶來誤差，建議在加完試劑后輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)板以幫助混勻，或者直接配置含10%cck-8的培養(yǎng)基，以換液的形式加入。另外注意，加樣的過程中盡量不要產(chǎn)生氣泡，以免影響od值讀數(shù)。7）將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱中孵育1-4h。因?yàn)榧?xì)胞種類不同，形成的formazan的量也不一樣，所以如果顯色不夠的話，可以延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間，特別是血液細(xì)胞形成的formazan很少，需要較長(zhǎng)的顯色時(shí)間（5-6h）。8）用酶標(biāo)儀測(cè)定450nm處的吸光度（od）。9）若暫時(shí)不測(cè)定od值，可以在各孔中加入10μl 0.1 m的hcl溶液或者1% w/v sds溶液，室溫避光保存，這樣可以保證od值24h內(nèi)不發(fā)生變化。