實時熒光定量pcr技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品ct值的計算，根據(jù)標準曲線獲得定量結(jié)果。因此，實時熒光定量pcr無需內(nèi)標是建立在兩個基礎(chǔ)之上的：
1）ct值的重現(xiàn)性pcr循環(huán)在到達ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此ct值的重現(xiàn)性ji好，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增，得到的ct值是恒定的。
2）ct值與起始模板的線性關(guān)系由于ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量pcr是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內(nèi)標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量pcr是迄今為止定量最準確，重現(xiàn)性*好的定量方法，已得到全世jie的*，廣泛用于基因表達研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。