β-gal染色試劑盒(組織專用)?
貨號(hào)：r0757
規(guī)格：100t
保存：-20℃，避光，12 個(gè)月。
簡介：?β
β-gal染色試劑盒(組織專用)?(β-galactosidase?staining?kit)是一種基于衰老時(shí)sa-β-gal?(senescence-associated?β-galactosidase)活性水平上調(diào)而對衰老細(xì)胞或組織進(jìn)行染色檢測的試劑盒。在普通的光學(xué)顯微鏡下就可以觀測到細(xì)胞或組織的衰老情況。絕大多數(shù)正常細(xì)胞被認(rèn)為僅有有限的分裂能力，在不能分裂后就進(jìn)入衰老狀態(tài)。此時(shí)細(xì)胞仍然是存活的，但細(xì)胞的基因和蛋白的表達(dá)譜發(fā)生了很大改變。?
β-gal染色試劑盒(組織專用)?以x-gal為底物，在衰老特異性的β-半乳糖苷酶催化下會(huì)生成深藍(lán)色產(chǎn)物，光學(xué)顯微鏡下很容易觀察到變成藍(lán)色的表達(dá)β-半乳糖苷酶的細(xì)胞或組織。本試劑盒僅染色衰老細(xì)胞，對衰老前的細(xì)胞(presenescent?cells)、靜止期細(xì)胞(quiescent?cells)、永生細(xì)胞(immortal?cells)或腫瘤細(xì)胞等不會(huì)染色。對于組織切片或組織塊應(yīng)采用冰凍切片，可以檢測的樣品數(shù)量視樣品的大小而定，對于普通的切片按每片1ml可以檢測100個(gè)樣品
組成：
名稱
規(guī)格
保存條件
試劑(a):?β-gal?fixative
100ml
4℃
試劑(b):?x-gal?solution
5ml
-20℃
試劑(c):?β-galstaining?a?solution
1ml
4℃
試劑(d):?β-galstaining?b?solution
1ml
4℃
試劑(e):?β-galstaining?c?solution
100ml
4℃
自備材料：?
1、pbs或hbss??
2、2、冷凍切片?
3、3、顯微鏡??
操作步驟(僅供參考)：?
1.對于組織切片或非常小的組織塊，加入適當(dāng)體積的β-gal fixative，染色固定液，以充分蓋住組織為宜，室溫固定不少于10分鐘。對于小的組織塊，固定時(shí)間應(yīng)該適當(dāng)延長。
2. 用pbs洗滌組織3次，每次不少于5分鐘。對于組織塊，時(shí)間還要適當(dāng)延長。
3.吸除pbs，每孔加入1毫升染色工作液。染色工作液的配制參照下圖。
4. 37℃孵育20分鐘至2小時(shí)，或更長時(shí)間，直至部分細(xì)胞的顏色變藍(lán)。如果孵育時(shí)間較長，可以用parafilm或保鮮膜封住放置組織的容器，以防止蒸發(fā)。
5. 吸除染色工作液，用pbs洗滌組織3次，每次不少于5分鐘。對于組織塊，時(shí)間還要相應(yīng)延長。
6. 普通光學(xué)顯微鏡下觀察。如不能及時(shí)觀察，可以去除染色工作液，加入2毫升pbs，4℃可以保存數(shù)天。
方法參考下表比例：
名稱
體積
β-galstaining?a?solution
10ul
β-galstaining?b?solution
10ul
β-galstaining?c?solution
930ul
x-gal?solution
50ul
說明：對于聚丙烯容器和聚苯乙烯容器的簡單的判定方法是：聚丙烯容器可以高溫高壓滅菌；而聚苯乙烯容器不適合高溫高壓滅菌，一旦高溫高壓處理就會(huì)嚴(yán)重變形。?4、37℃孵育2h至過夜，直至樣品顯藍(lán)色?？梢杂胮arafilm或保鮮膜封住防止蒸發(fā)，把整個(gè)切片浸泡在染色工作液中，應(yīng)注意37℃孵育不能在二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行。?5、普通光學(xué)顯微鏡下觀察。如不能及時(shí)觀察，加上封片液封片后4℃可以保存較長時(shí)間。?
注意事項(xiàng)：?
1、?β-gal?fixative有一定的腐蝕性和氣味，操作時(shí)請注意防護(hù)。?
2、?β-gal?染色反應(yīng)依賴于特定的ph條件，不能在二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行染色反 應(yīng)。用于細(xì)胞培養(yǎng)的二氧化碳培養(yǎng)箱中較高濃度的二氧化碳會(huì)影響染色工作液的ph值，而導(dǎo)致染色失敗。?
3、?配制染色工作液時(shí)需使用聚丙烯(polypropylene)容器或玻璃容器，不宜使用聚苯乙烯 (polystyrene)容器。但染色時(shí)可以在聚苯乙烯(polystyrene)容器中進(jìn)行，例如普通的6孔板就可以用作染色的容器。??
有效期：?12個(gè)月有效。
關(guān)鍵詞：光學(xué)顯微鏡 顯微鏡 普通光學(xué)顯微鏡 二氧化碳培養(yǎng)箱 培養(yǎng)箱