細(xì)胞株免疫熒光主要用于蛋白定位研究和細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，細(xì)胞免疫熒光技術(shù)是利用免疫技術(shù)和熒光標(biāo)記技術(shù)相結(jié)合，原理就是利用抗原-抗體反應(yīng)之后，采用熒光標(biāo)記，標(biāo)記完成后，顯微鏡下觀察細(xì)胞內(nèi)某種抗原成分的多少，從而做出一個(gè)定位研究，也可以為細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)提供一個(gè)明確的指導(dǎo)，細(xì)胞免疫熒光具有敏感性強(qiáng)、特異性高、速度快的特點(diǎn)，是目前比較常用的組織學(xué)技術(shù)，也是比較準(zhǔn)確的。
一、實(shí)驗(yàn)方法原理
在進(jìn)行細(xì)胞免疫熒光過程中，需要用到細(xì)胞爬片，通過將爬片浸在細(xì)胞培養(yǎng)基內(nèi)，細(xì)胞在爬片上生長，進(jìn)而進(jìn)行細(xì)胞的免疫熒光。
二、實(shí)驗(yàn)材料
1. 細(xì)胞樣品。
2. 試劑、試劑盒：多聚甲醛 70%甲醇 丙酮 pbs triton bsa dapi染液 dabco tris 甘油。
3. 儀器、耗材：玻片。
三、細(xì)胞爬片免疫熒光實(shí)驗(yàn)步驟
第yi天：
1. 在培養(yǎng)板中將已爬好細(xì)胞的玻片用pbs浸洗3次，每次3min。
2. 用4%的多聚甲醛固定爬片15min， pbs浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5%triton x-100(pbs配制)室溫通透20min(細(xì)胞膜上表達(dá)的抗原省略此步驟)。
4. pbs浸洗玻片3次，每次3min，吸水紙吸干pbs，在玻片上滴加正常山羊血清，室溫封閉30min。
5. 吸水紙吸掉封閉液，不洗，每張玻片滴加足夠量的稀釋好的一抗并放入濕盒，4℃孵育過夜。
第二天：
6. 加熒光二抗： pbst 浸洗爬片3次，每次3min，吸水紙吸干爬片上多余液體后滴加稀釋好的熒光二抗，濕盒中20-37℃孵育1h，pbst浸洗切片3次，每次3min。注意：從加熒光二抗起，后面所有操作步驟都盡量在較暗處進(jìn)行。
7. 復(fù)染核：滴加dapi避光孵育5min，對(duì)標(biāo)本進(jìn)行染核，pbst 5minx4次洗去多余的dapi。
8. 用吸水紙吸干爬片上的液體，用含抗熒光淬滅劑的封片液封片，然后在熒光顯微鏡下觀察采集圖像。
注意事項(xiàng)
1. 取細(xì)胞株爬片時(shí)，動(dòng)作應(yīng)輕柔，防止將細(xì)胞爬片夾碎，影響實(shí)驗(yàn)進(jìn)程。
2. 種細(xì)胞過程中，要注意將細(xì)胞輕柔混勻，“八”字或者“十”字形搖晃，防止細(xì)胞局部生長過密。
關(guān)鍵詞：顯微鏡 熒光顯微鏡