il-8是一種分子量為8～10kd的多肽，對(duì)嗜中性粒細(xì)胞，t淋巴細(xì)胞、嗜鹼性粒細(xì)胞具有趨化作用，并可激活嗜中性粒細(xì)胞，是一種重要的炎癥介質(zhì)。在嚴(yán)重感染病人的血清中、炎癥局部滲出液中都可檢測(cè)到高水平的il-8。此外，近年來(lái)的研究表明，il-8可能與各種組織缺血后再灌注損傷的發(fā)生有關(guān)。有關(guān)科研人員采用兩株自制的單克隆抗體建立了夾心法elisa用于檢測(cè)il-8，敏感性可達(dá)156pg/ml。
相關(guān)專(zhuān)題elisa免疫實(shí)驗(yàn)技術(shù)
il-8是一種分子量為8～10kd的多肽，對(duì)嗜中性粒細(xì)胞，t淋巴細(xì)胞、嗜鹼性粒細(xì)胞具有趨化作用，并可激活嗜中性粒細(xì)胞，是一種重要的炎癥介質(zhì)。在嚴(yán)重感染病人的血清中、炎癥局部滲出液中都可檢測(cè)到高水平的il-8。此外，近年來(lái)的研究表明，il-8可能與各種組織缺血后再灌注損傷的發(fā)生有關(guān)。我們采用兩株自制的單克隆抗體建立了夾心法elisa用于檢測(cè)il-8，敏感性可達(dá)156pg/ml，操作簡(jiǎn)單，重復(fù)性良好，可用于il-8的基礎(chǔ)和臨床研究。
一、原理：采用兩株識(shí)別不同表位的抗il-8單克隆抗體，其中一株(4d7)作為包被抗體，以識(shí)別和結(jié)合待檢標(biāo)本中的il-8,另一株作為酶標(biāo)抗體，與結(jié)合于包被抗體的il-8的另一個(gè)表位結(jié)合并催化底物顯色。
二、試劑器材
1. 試劑盒提供包被抗體、酶標(biāo)抗體、標(biāo)準(zhǔn)品，底物(abts)、96孔elisa板。
2. 包被緩沖液、pbs、底物緩沖液配制同常規(guī)elisa法。
三、操作步驟：
1. 包被：ph9.5 碳酸鹽緩液稀釋4d7單克隆抗體粗提γ球蛋白至1μg/ml,加入96孔板,100μl/孔，放4℃,36小時(shí)。
2. 封閉：0.1%吐溫pbs(buffer a)沖洗96孔板三次，加3%bsa buffer a(buffer b)200μl/孔，放37℃,1小時(shí)。
3. 加待檢樣品：buffer a 沖洗96孔板三次，加待檢樣品及buffer b 稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品100μl/孔，放37℃,3小時(shí)。
4. 加酶標(biāo)抗體：buffer a沖洗96孔板五次,3%peg buffer a稀釋酶標(biāo)抗體至1∶800，加入96孔板，100μl/孔，放37℃,1小時(shí)。
5. 顯色：buffer a沖洗96孔板五次，ph5.4檸檬酸緩沖液溶解底物(abts),0.2mg/ml,加3%h2o2,2μl/ml，加入96孔板，100μ/孔，室溫下或37℃顯色。
四、注意事項(xiàng)：
1. 待檢標(biāo)本如為血清，應(yīng)采用一次性容器，血液采集后盡快(6小時(shí)以?xún)?nèi))分離血清。
2. 封閉液或抗體稀釋液應(yīng)新鮮配制或凍存。