1、最好使用一次性進(jìn)口tip頭，以避免液體殘留；同時(shí)，tip頭不要長時(shí)間暴露于空氣中，避免氣溶膠的污染。2、加樣時(shí)，tip頭要伸入pcr反應(yīng)管的液面下一點(diǎn)，然后將液體緩緩打入液面下，至恰好打出一個(gè)小氣泡為至；加樣過程最好在冰塊上操作；移液槍用完之后要?dú)w到最大計(jì)量的位置，防止久而久之彈簧失去彈性，而導(dǎo)致加樣量的不準(zhǔn)確。3、配制反應(yīng)體系時(shí)，若反應(yīng)物為凍結(jié)制品，需在融解后上下顛倒輕輕均勻混合；加入試劑之前，把它混勻一下，以免放置時(shí)間長了濃度不均；按照液體體積由大到小的順序?qū)⒎磻?yīng)物加入到pcr管中；引物和模板和體系所加的比例要合適，模板過量反而會(huì)抑制體系的反應(yīng)。4、操作多份樣品時(shí)，可先制備反應(yīng)混合液，即將dntp、緩沖液、引物和酶混合好后分裝，這樣即可避免污染，又可增加反應(yīng)的精確度。5、避免反應(yīng)液飛濺,打開反應(yīng)管時(shí)為避免此種情況,開蓋前稍離心；pcr產(chǎn)物的電泳檢測時(shí)間一般為48h以內(nèi)，有些最好于當(dāng)日電泳檢測，大于48h 后帶型不規(guī)則甚至消失。6、如凝膠分析擴(kuò)增產(chǎn)物只有一條帶，不需要用凝膠純化。如可見其他雜帶，可能是積累了大量引物的二聚體。少量的引物二聚體的摩爾數(shù)也很高，這會(huì)產(chǎn)生高比例的帶有引物二聚體的克隆，而非目的插入片段。為此需在克隆前做凝膠純化。
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