大鼠elisa試劑盒原理:
采用競爭法測定金黃地鼠氧化低密度脂蛋白oxldl水平。用金黃地鼠氧化低密度脂蛋白oxldl抗原包被微孔板,制成固相載體,實驗時依次在微孔板中加入標本及標準品,并加入hrp標記的oxldl抗體,標本及標準品中的大鼠elisa試劑盒抗體和一定量的酶標抗體競爭與固相抗原結(jié)合。反復(fù)洗滌后加底物tmb顯色。tmb在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化為藍色,再用硫酸終止反應(yīng),轉(zhuǎn)變成黃色。標本中抗體量越多,結(jié)合在固相上的酶標抗體愈少,顏色越淺。顏色的深淺和樣品中的oxldl含量呈負相關(guān)。采用酶標儀在450nm波長測定吸光度(od值),根據(jù)標準曲線,計算測試樣品中oxldl濃度。
大鼠elisa試劑盒操作程序:
1. 棄去液體,甩干,每孔加滿稀釋后洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。如此重復(fù)5次,拍干。
2. 每孔先加入顯色劑a50μl,再加入顯色劑b50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘。。
3. 取出酶標板,每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
4.測定:以空白孔調(diào)零,在450nm波長下測量各孔的吸光度值(od值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
5.根據(jù)標準品大鼠elisa試劑盒的濃度及對應(yīng)的od值計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據(jù)樣品的od值在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了的,其實際濃度應(yīng)該乘以總稀釋倍數(shù)。
大鼠elisa試劑盒樣本處理及要求:
1. 血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2. 血漿:可用edta或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8°c 1000g離心20分鐘,或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3. 細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本:1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
注:標本溶血大鼠elisa試劑盒會影響zui后檢測結(jié)果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。