熒光假單胞菌核酸檢測試劑盒(恒溫?zé)晒夥ǎ┮镂逡?/h1> 發(fā)布時間:2024-07-24

熒光假單胞菌核酸檢測試劑盒(恒溫?zé)晒夥ǎ┮铮阂锸莗cr特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,pcr 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板dna互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板dna序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用pcr就可將模板dna在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:g+c含量以40-60%為宜,g+c太少擴增效果不佳,g+c過多易出現(xiàn)非特異條帶。atgc*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是z末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致pcr失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
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