除非特殊說(shuō)明，在所有情況下，所用溶劑的體積應(yīng)該是色譜柱體積的40~60倍。應(yīng)在清洗過(guò)程開(kāi)始和結(jié)束時(shí)各測(cè)一次柱效和容量因子等色譜參數(shù)，比較液相色譜儀色譜柱性能的改善，以確定清洗的效果。確保色譜柱中沒(méi)有樣品盒緩沖溶液，清洗前所用的溶劑應(yīng)與zui初清洗時(shí)所用的溶劑相溶。應(yīng)確保實(shí)驗(yàn)測(cè)試時(shí)所用的流動(dòng)相與色譜柱中zui后的溶劑相溶。
zui常見(jiàn)色譜柱再生用溶劑及其順序見(jiàn)下表：
填料類(lèi)型
再生用溶劑及其順序
正相填料
用四氫呋喃沖洗；用甲醇沖洗；用四氫呋喃沖洗；二氯甲烷沖洗；用無(wú)本正己烷沖洗
反相填料
用hplv級(jí)水沖洗，沖洗時(shí)進(jìn)4等份的200µl二甲亞砜；用甲醇沖洗；用氯仿沖洗；用甲醇沖洗；
陰離子交換填料
用hplc級(jí)水沖洗；用甲醇沖洗；用氯仿沖洗
陽(yáng)離子交換填料
用hplc級(jí)水沖洗；在沖洗的過(guò)程中進(jìn)4等份的200µl的dmso；四氫呋喃清洗
蛋白質(zhì)凝膠過(guò)濾填料
去除蛋白質(zhì)尺寸排阻介質(zhì)中的污染有兩種清洗/再生的方法：1弱保留蛋白質(zhì)，用30mol/l ph3.0磷酸鹽緩沖液沖洗；2強(qiáng)保留蛋白質(zhì)，用99%的水到99%的乙腈梯度洗脫60min
關(guān)鍵詞：色譜柱 液相色譜儀