前 言
糖類分析的主要目的有兩類:即單糖、寡糖的組成和多糖的分子量及其發(fā)布。糖類物質(zhì)的分離主要通過hplc在色譜柱中實(shí)現(xiàn),日本昭和電工長期致力于色譜柱研發(fā)生產(chǎn),產(chǎn)品多種多樣,無論您的課題是涉及有機(jī)聚合物、蛋白質(zhì)及肽、糖類、有機(jī)酸、藥物或無機(jī)離子,您都可以找到一款合適的shodex hplc色譜柱。它性能優(yōu)異,主要體現(xiàn)在:;柱壽命長;優(yōu)良的機(jī)械強(qiáng)度和化學(xué)穩(wěn)定性。有關(guān)糖類分析用色譜柱詳見以下各章節(jié)。
絕大多數(shù)的糖類物質(zhì)無紫外吸收,所以不能很好地使用uv檢測器測定。其檢測手段目前常見的主要有以下三種。
1.示差折光檢測器ri
ri是一種通用型檢測器,具有廣泛的使用范圍,它對沒有紫外吸收的物質(zhì),如高分子化合物、糖類、脂肪烷烴等都能夠檢測。ri還適用于流動相紫外吸收本底大,不適于紫外吸收檢測的體系。在凝膠色譜中ri是*的,尤其是對聚合物分子量分布的測定。利用gpc+ri+標(biāo)準(zhǔn)品,我們可以得到被測物質(zhì)的相對分子量。
德國珊貝克公司的sch2000檢測器是一種新概念示差折光檢測器, 它使用微處理器,使得從溶液置換到基線穩(wěn)定核查能夠自動進(jìn)行,穩(wěn)定快速。sch2000與以往不同的液相色譜用示差折光檢測器相比,具有以下的特長:
優(yōu)越的操作性:*的快速平衡功能,在30分鐘內(nèi)自動平衡基線。檢測器配備彩色液晶顯示器, 易于分析人員一眼就看到操作狀態(tài)和基線傾向;自動啟動功能,使之可自動進(jìn)行從參比池的溶液置換到基線穩(wěn)定性核查的復(fù)雜操作;用幫助功能,很容易確定和校對裝置。
出眾的穩(wěn)定性:通過溫度調(diào)節(jié)方式的*化,電源打開后穩(wěn)定化時(shí)間縮短,并可獲得出眾的基線穩(wěn)定性。
安全措施:檢測器配備泄漏感應(yīng)器,萬一溶劑泄漏,泵可以自動停止。
多種自動功能:檢測器設(shè)有外部輸入輸出端子以及rs232c通道端口,把檢測器與各種液相色譜組合能實(shí)現(xiàn)高度自動化。
由于快速自動啟動功能,達(dá)到穩(wěn)定時(shí)間被減半。檢測器穩(wěn)定可在彩色顯示器上自動測定核查。
2.粘度檢測器
高聚物溶液中的[η]與分子量之間存在著以下定量關(guān)系:
3.光散射檢測器(ls)
光散射技術(shù)測定高聚物的重均分子量(按分子重量統(tǒng)計(jì)平均得到的分子量),是當(dāng)前應(yīng)用較為廣泛的一種方法。凝膠色譜分離-光散射檢測器的結(jié)合不但可以直接測量大分子的分子量及分布,還可以得到分子形狀、動力學(xué)半徑、枝化度等信息。
美國pd公司的pd2000系列的光散射*與70年代的小角光散射和80年代的多角光散射不同。小角光散射是忽略角度,只進(jìn)行濃度外推。多角光散射是忽略濃度。pd的光散射利用得拜公式,用角度和濃度同時(shí)參與計(jì)算。pd2000家族的儀器提供溶液中的聚合物和生物高分子新的的數(shù)據(jù)——分子量、尺寸、形態(tài)和其他的特征參數(shù)。它具有以下優(yōu)點(diǎn):①高靈敏度;②*的重復(fù)性;③高精度;④易于操作;⑤快速從復(fù)以前的試驗(yàn)結(jié)果;⑥易于拆卸清洗;⑦長期穩(wěn)定工作;⑧較小的池體積(10微升),與ri聯(lián)用引起峰加寬效應(yīng)??;⑨采用聚焦光路,可以將散射體積見到zui小,得到很高的信噪比。其適用范圍涉及:1)仿生學(xué)和醫(yī)藥;2)塑料和其他的聚合物;3)蛋白質(zhì)和多糖類;4)油漆和涂料;5)石油化學(xué)制品;6)潤滑油;7)添加物 ;8)食品生產(chǎn);9)環(huán)保等,政府,并且其他實(shí)驗(yàn)室。
分離測試技術(shù)
除了常見的hplc分離模式之外,現(xiàn)在又新興起了場流分離色譜(fff),也可以用來進(jìn)行多糖的分離。非對稱場流分離色譜(af4)屬于fff家族的一員,是一個新的、有效快速分離和準(zhǔn)確描述不同的粒子和大分子的方法。它zui早在幾年前在文獻(xiàn)上有報(bào)道,是一個新的與色譜類似的分離技術(shù),分離范圍用來從103到1012道爾頓。
德國postnova公司hrfff 10.000系列非對稱場流分離色譜是以非對稱場流分析原理為基礎(chǔ)來工作的,是一項(xiàng)用來分離和表征流體中粒子和大分子的新穎和有效率的分離方法,它是世界上zui早的全自動化af4系統(tǒng)。該系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)的配置包括不同的泵、檢測器、自動進(jìn)樣器等。10.000系列系統(tǒng)能通過樣品分子尺寸大小的差異來實(shí)現(xiàn)分離并檢測分子量、rg、rh等。其應(yīng)用范圍包括生物技術(shù)、多糖、藥物、蛋白質(zhì)、抗體、環(huán)境科學(xué)、材料科學(xué)等。
hrfff 10.000優(yōu)勢包括:
l 不使用固定相,分離迅速準(zhǔn)確
l 直接進(jìn)樣,沒有必要的樣品預(yù)處理步驟
l 適用于不同的分離條件水相和有機(jī)溶劑,分子量和尺寸測定范圍大且容易得到
l 快速分離復(fù)雜的聚合物、粒子和膠體體系
l 分離中小的作用力能保護(hù)樣品的生物活性
更詳細(xì)的資料請查閱,或來電來函向我們索取。
通過分離模式進(jìn)行色譜柱的選擇
凝膠滲透色譜(gfc)柱主要使用來分析淀粉等糖類物質(zhì)。但是在分析小分子量范圍且彼此之間分子量相近的糖時(shí),僅僅憑借gfc模式就達(dá)不到一個令人滿意的結(jié)果了。shodex 糖類分析用色譜柱由配位交換、離子交換、離子排阻、正/反相和凝膠過濾等多種模式組成,這些色譜柱適合于分析不同種類的糖。
通過樣品種類選擇色譜柱樣品種類所選擇色譜柱
普通食品中大的糖類sc1011
包含有寡糖的食品sc1821,ks-802,ks-802+sc1011
奶制品(蔗糖、奶糖)sp0810
發(fā)酵產(chǎn)品中的糖類、有機(jī)酸、醇類物質(zhì)sh1011,1821
包含糖酸的樣品,如:糖醛酸sh1011,1821
木材、果肉中的糖類sp0810
色譜柱 selection: by elution volume
在下表中給出了shodex sugar系列色譜柱ks-802,sc1011,sp0810,sc1211和sz5532保留體積范圍。
色譜柱的選擇:通過糖的自然狀態(tài)
如下表所示,我們可以根據(jù)糖類的自然狀態(tài)來選擇色譜柱,像單糖、雙糖、寡糖、多糖、糖醇、有機(jī)酸、食物纖維。根據(jù)分析條件選擇色譜柱
如下表所示,可以根據(jù)分析條件進(jìn)行色譜柱的選擇。
根據(jù)糖類化合物進(jìn)行色譜柱的選擇下表中根據(jù)糖類化合物進(jìn)行色譜住的選擇。 要分離的糖類色譜柱的選擇
單糖
glu,frusp0810,sc1011,sc1211,ks-801
glc,gal,frusp0810,sc1011,sc1211
glc,gal,mansp0810
glc,gal,arasp0810,sc1011,sz5532
glc,xyl,arasp0810,sc1011,sz5532
glc,fru,*sc1011,sc1211,sc1811,sz5532
glc,gal,*,ducitolsp0810,sc1011
glc,gal,man,*,ducitol,*sp0810
glc,fru,gly,etohsc1011,sc1211,ks-801
glc,fru+alcoholssc1011,sh1011,sc1211
glc,fru+organic acidssh1011,sh1821
二糖
suc,lacsz5532
suc,malsz5532
suc,mal,lacsz5532
mal,iso麥芽糖sz5532
lac,lactulosesp0810,sc1011
suc,glc,frusc1011,sc1211,ks-801,sz5532
suc,lac,glc,gal,frusz5532
mal,glc,fru,gly,etohsc1011,sc1211,ks-801
cel,glc,gal,man,xyl,arasp0810
mal,glc,fru,*sp0810,sc1011,sc1211,sz5532
mal,glc,fru+alcoholssc1011,sc1211,sh1011
mal,glc,fru+organic acidssh1011,sh1821
suc,glc,fru,*sp0810,sc1011,sc1211,sc1821
mal,maltitolsp0810,sc1011,sc1211,sz5532
suc,lac,mal,maltitolsz5532
glc,suc,erythrytolsp0810,sc1011,ks-801
mal,glc,fru,erythrytolsp0810,sc1011
寡糖
sta,raf,mal,glc,gal,arasc1011,ks-801,sz5532
g4,g3,mal,glcsc1011,ks-801,ks-802
sta,raf,suc,glcsc1011,ks-801,sz5532
raf,suc,glc,fru,araks-801
maltooligosaccharidesc1821,ks-802,sz5532
maltooligosaccharide+alcoholssc1821,ks-802,sh1821
maltooligosaccharide+organic acidssh1821
maltooligosaccharide+sugar alcoholssc1821,sc1011,ks-802
糖醇
*,*sc1011,sc1211,sz5532
sobitol,*,*sp0810,sc1211,sz5532
sobitol,dulcitol,*sp0810,sc1011,sz5532
maltitol,*sc1011,sc1211,sz5532
maltitol,dulcitol,arabitol,*,*,*sc1211
ara: 樹膠醛糖 cel: 細(xì)胞乙糖 fru: 果糖 g3: 麥芽三糖 g4: 麥芽四糖 gal: 半乳糖 glc: 葡萄糖 gly: 甘油(丙三醇) lac: 乳糖 mal: 麥芽糖 man: 甘露糖 raf: 棉籽糖 sta: 水蘇(四)糖 suc: 蔗糖 xyl: 木糖(戊醛糖)