植物內(nèi)源基因trnaleu核酸檢測試劑盒實(shí)驗(yàn)要點(diǎn):
1.ctab 溶液在低于15℃時(shí)會(huì)析出沉淀,因此在將其加入冷凍的植物材料中之前必須預(yù)熱。
2.在最適條件下,dna—ctab 沉淀呈白色纖維狀,很容易一下子就從溶液中鉤出。不過,某些植物種的dna 沉淀中可能含有雜質(zhì),特別是多糖,使dna 沉淀呈絮狀或膠狀,這種情況下可能需要稍事離心才能得到dna. —ctab 沉淀。
3.飽和酚雖然可有效地使蛋白質(zhì)變性,但酚不能抑制rna 酶的活性,而且酚可以溶解含poly(a)的mrna。如果用苯酚和氯仿的混合液,可減輕這兩種現(xiàn)象,同時(shí)可加入適量的異戊醇(苯酚—氯仿—異戊醇=25:24:1),異戊醇的作用是消泡,并使蛋白質(zhì)層緊密,使水相和有機(jī)相分層較好。 細(xì)菌的培養(yǎng)和收集 將含有質(zhì)粒pbs 的dh5α菌種接種在lb 固體培養(yǎng)基(含50μg/ml amp)中, 37℃培養(yǎng)12-24 小時(shí)。用無菌牙簽挑取單菌落接種到5ml lb 液體培養(yǎng)基(含50μg/ml amp)中,37℃振蕩培養(yǎng)約12 小時(shí)至對數(shù)生長后期。小量提取法對于從大量轉(zhuǎn)化子中制備少量部分純化的質(zhì)粒dna 十分有用。這些方法共同特點(diǎn)是簡便、快速,能同時(shí)處理大量試樣,所得dna 有一定純度,可滿足限制酶切割、電泳分析的需要。