海馬體主要負(fù)責(zé)記憶和學(xué)習(xí)，日常生活中的短期記憶都儲存在海馬體中。神經(jīng)元是構(gòu)成神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)和功能的基本單位。神經(jīng)元具有長突起，由細(xì)胞體和細(xì)胞突起構(gòu)成。
小鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞的組織來源于實驗小鼠的正常腦組織，因為海馬神經(jīng)元細(xì)胞類似于干細(xì)胞屬于高分度分化的細(xì)胞特性，具有不能傳代，不能增殖等特點(diǎn)，所有收到細(xì)胞后盡快使用。
1.試驗所需儀器設(shè)備及試劑
（1）儀器
生物安全柜
co2細(xì)胞培養(yǎng)箱
熒光倒置顯微鏡
高速冷凍離心機(jī)
電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱
（2）試劑耗材
t25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
血球計數(shù)板
細(xì)胞培養(yǎng)孔板
紅細(xì)胞裂解液
神經(jīng)元*培養(yǎng)基
0.25%胰蛋白酶（含0.02%edta）
多聚甲醛（pfa）
dapi
triton x-100
山羊血清
nse
goat anti-rabbit lgg（h+l）
cross-adsorbed secondary antibody，alexa fluor 594
fluoromount-g熒光封片劑
2.分離培養(yǎng)方法
1)取1-10 d的新生小鼠。用75%的乙醇浸泡，
2)在冰浴的pbs中分離海馬，pbs洗滌3次，剪碎，
3)用0.25%trypsin+0.1%ⅰ型膠原酶37℃水浴振蕩消化30min，
4)用fbs終止消化，輕輕吹打，
5)過100 μm 濾網(wǎng)，
6)收集濾液，300 g離心5min，
7)用*培養(yǎng)基重懸沉淀，鋪瓶。
3.免疫熒光
3.1.實驗步驟
（1）細(xì)胞爬片
取3片玻璃片于24孔板中，每孔加入培養(yǎng)基1ml，加入細(xì)胞0.02million個/孔。置培養(yǎng)箱2h或過夜。
（2）固定
細(xì)胞爬片后，吸出培養(yǎng)基，用pbs洗1遍，加入4% pfa于4℃固定30min。用pbs洗3×5min/次。也可最后一次不吸出pbs，放4℃過夜。
（3）破膜封閉
將玻片除去水分，置于培養(yǎng)皿支撐物上，
玻璃片封閉液配置：0.5% trition x-100與pbs 1:1混合，再加10% 血清，
取50ul破膜封閉液滴于防水膜上，將玻片上有細(xì)胞的一面蓋上2h。
（4）一抗孵育
一抗配制：抗體與pbs 1:100（200）稀釋
破膜封閉后，取50ul一抗于防水膜上（濕盒中），將玻片（有細(xì)胞的一面）蓋上置于4℃（最多可放置一周）
（5）二抗孵育
室溫避光孵育二抗（二抗:pbs=1:500）2h后，pbs洗3×5min/次，染dapi（dapi:pbs=1:1000）5min，pbs洗3×5min/次。
（6）包埋
玻片上各滴1滴fluoromount-g，將有細(xì)胞的一面蓋上。
鑒定細(xì)胞為p1代細(xì)胞
3.2.檢測結(jié)果 （1）細(xì)胞免疫熒光鑒定照片
陰性
100x-dapi 100x-fluorescence
nse
100x-dapi 100x-fluorescence
（2）檢驗基本情況：
經(jīng)免疫熒光鑒定，該細(xì)胞純度達(dá)到90%以上。