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minutetm無表面活性劑的厚壁微生物總蛋白
提取試劑盒
目錄號yd-016
描述：
從厚壁微生物中提取蛋白質(zhì)是實(shí)驗室常見的實(shí)驗操作，傳統(tǒng)的操作方法非常復(fù)雜，冗長，不可
控。本試劑盒提供了一種無表面活性劑，快速，可靠的從厚胞壁微生物提取總蛋白的方法?？?br>以從酵母，絲狀真菌，革蘭氏陽性和陰性菌，蟲卵，微藻中等提取總蛋白。試劑盒提供了優(yōu)化
的無表面活性劑和edta的緩沖液。試劑盒所有步驟在單一管內(nèi)完成，時間＜10分鐘，得率可
達(dá)2-4 mg/ml.可用于對數(shù)生長期和靜止生長期微生物。提供的原材料做夠做50次提取。
應(yīng)用：
提取的蛋白可應(yīng)用于sds-page、wb，ip，elisa，酶活性檢測和蛋白質(zhì)組學(xué)分析。緩沖液可以兼容imac
樹脂用于his-標(biāo)簽蛋白純化。
試劑盒組分
1. 20ml緩沖液a
2. 20ml緩沖液b
3. 5g蛋白提取粉
4. 4根1.5ml離心管塑料研磨棒
5. 50個1.5ml離心管
儲存：
室溫儲存
所需附加材料
臺式離心機(jī)（最大轉(zhuǎn)速14000-16000rpm）
產(chǎn)品重要信息
蛋白酶抑制劑不是必須加入，但是如果下游實(shí)驗需要較長時間或者蛋白提取后需要保存較長時
間，建議在緩沖液中添加蛋白酶抑制劑。推薦使用bca（pierce）試劑盒用于蛋白濃度測定。
研究蛋白磷酸化，磷酸酶抑制劑應(yīng)在使用前加入緩沖液。
操作方法：
1.在1.5ml離心管中離心收集微生物樣品。確保樣品體積在20-30ul左右。可以在另一個1.5ml
離心管中加入30ul水比較體積估算。
2.加入1ml水，最高速度離心2分鐘清洗樣品，棄去上清液。加入50ul buffer a重懸沉淀。
秤取80-90mg蛋白提取粉加入管中（提取粉盡量不要接觸管壁，可折疊稱量紙倒入）。
3.用配有的研磨棒反復(fù)扭轉(zhuǎn)研磨2分鐘。再次加入50ul緩沖液a和100ul緩沖液b到同一管
中，繼續(xù)研磨約30秒(注意：研磨棒可以重復(fù)使用，在清洗劑中簡單浸泡后，用水沖洗并用紙
巾擦干）。蓋上蓋子渦旋震蕩10秒鐘。
4.最高速離心3-4分鐘。將上清液轉(zhuǎn)移到新管中（此部分為無表面活性劑的總蛋白）。如果希
望增加蛋白產(chǎn)量，可以重復(fù)步驟3-4一次。通常蛋白產(chǎn)量為2-3mg/ml。提取的蛋白可以儲存于
-80℃供將來使用。
應(yīng)用提示：最終的蛋白質(zhì)產(chǎn)量與步驟3中研磨的頻率和時間成正比。研磨時請使用試劑盒中提
供的研磨棒和離心管，以保證最佳效果。
關(guān)鍵詞：臺式離心機(jī) 清洗劑