蛋白標簽(protein tag)又稱為標簽蛋白,是利用dna體外重組技術(shù),將目的蛋白與其融合表達形成的一種多肽或蛋白。這種標簽有助于目的蛋白的表達、檢測、示蹤和純化等操作。隨著技術(shù)的不斷進步,研究人員已經(jīng)成功開發(fā)出了具有各種不同功能的蛋白標簽。然而,由于不同的蛋白標簽具有各自的特性,因此在質(zhì)粒構(gòu)建過程中常常會遇到多種問題。今天,我們將深入探討蛋白標簽的各個方面。
蛋白標簽類型
蛋白標簽主要分為三類,適用于不同的應(yīng)用場景:表位標簽、親和標簽和熒光標簽。
①表位標簽往往是短肽序列,可用于免疫學(xué)應(yīng)用,如 western blot 和免疫共沉淀。常用的表位標簽有his、flag、ha等。
②親和標簽一般較長,可增加蛋白溶解度,廣泛應(yīng)用于重組蛋白的純化,如sumo、trx、mbp等。
③熒光標簽可用于活細胞和死細胞檢測,常用的熒光蛋白包括綠色熒光蛋白(gfp)、橙色熒光蛋白(ofp)、紅色熒光蛋白(rfp)和黃色熒光蛋白(yfp)。它們被廣泛用于影像學(xué)研究,如細胞定位和共表達實驗。
蛋白標簽在重組蛋白生產(chǎn)中有什么作用?
1、識別:給蛋白加標簽使其易于識別,進而快速鑒定感興趣的蛋白質(zhì)。
2、純化:利用標簽蛋白對目的蛋白進行純化。例如,his6是一種由六個組氨酸殘基組成的融合標簽,可以插入目的蛋白的c末端或n末端。組氨酸殘基側(cè)鏈與固態(tài)的鎳有強烈的吸引力,這使得his6標簽可用于固定化金屬螯合層析(imac),從而對重組蛋白進行分離純化。
3、定量:通過量化標簽來確定目的蛋白的存在量。
4、定位:通過定位標簽蛋白定位到目標蛋白在細胞中的特定位置,進而研究其生理功能、信號通路等。
5、跟蹤:在細胞、組織和生物體中,通過追蹤標簽蛋白質(zhì)追蹤目的蛋白,以研究它們的表達、分布、代謝等生物學(xué)過程。
總之,蛋白標簽在重組蛋白生產(chǎn)中扮演著重要的角色,它們不僅提高了生產(chǎn)效率,還為蛋白的檢測、純化和示蹤提供了便利。
常用的蛋白標簽有:his-tag、flag-tag、ha-tag、myc-tag、sumo-tag、trx-tag、gst-tag……義翹神州不僅可提供重組蛋白表達定制服務(wù),也可提供對應(yīng)標簽抗體產(chǎn)品及融合蛋白標簽切除常用工具酶,如ek蛋白酶、3c蛋白酶等。下圖是具體蛋白標簽的序列和大小介紹,詳情可以關(guān)注:cn.sinobiological com/resource/protein-review/protein-tag