ATCC細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)注意事項(xiàng)

發(fā)布時(shí)間:2024-07-17
1.atcc細(xì)胞實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前,無菌室及無菌操作臺(tái)(laminar flow) 以紫外燈照射30-60 分鐘滅菌,以70 % 擦拭無菌操作抬面,并開啟無菌操作臺(tái)風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)10 分鐘后,才開始實(shí)驗(yàn)操作。每次操作只處理一株細(xì)胞株,且即使培養(yǎng)基相同亦不共享培養(yǎng)基,以避免失誤混淆或細(xì)胞間污染。實(shí)驗(yàn)完畢后,將實(shí)驗(yàn)物品帶出工作臺(tái),以70 % 擦拭無菌操作抬面。操作間隔應(yīng)讓無菌操作臺(tái)運(yùn)轉(zhuǎn)10 分鐘以上后,再進(jìn)行下一個(gè)細(xì)胞株之操作。
2. 無菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞,必要物品,例如試管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暫時(shí)放置,其它實(shí)驗(yàn)用品用完即應(yīng)移出,以利于氣流之流通。實(shí)驗(yàn)用品以 70 % 擦拭后才帶入無菌操作臺(tái)內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在抬面之中央無菌區(qū)域,勿在邊緣之非無菌區(qū)域操作。
3. 小心取用無菌之實(shí)驗(yàn)物品,避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口,亦不要在打開之容器正上方操作實(shí)驗(yàn)。atcc細(xì)胞容器打開后,以手夾住瓶蓋并握住瓶身,傾斜約45° 角取用,盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。
4. 工作人員應(yīng)注意自身之安全,須穿戴實(shí)驗(yàn)衣及手套后才進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對(duì)于來自人類或是病毒感染之細(xì)胞株應(yīng)特別小心操作,并選擇適當(dāng)?shù)燃?jí)之無菌操作臺(tái)(至少 class ii)。操作過程中,應(yīng)避免引起aerosol 之產(chǎn)生,小心毒性藥品,例如dmso 及tpa 等,并避免尖銳針頭之傷害等。
5. 定期檢測(cè)下列項(xiàng)目: 5.1. co2 鋼瓶之co2壓力 5.2. co2 培養(yǎng)箱之co2濃度、溫度、及水盤是否有污染(水盤的水用無菌水,每周更換)。 5.3. 無菌操作臺(tái)內(nèi)之a(chǎn)irflow 壓力,定期更換紫外線燈管及hepa 過濾膜,預(yù)濾網(wǎng)(300小時(shí)/預(yù)濾網(wǎng),3000 小時(shí)/hepa)。
6. atcc細(xì)胞水槽可添加消毒劑(zephrin 1:750),定期更換水槽的水
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