本生課堂：使用pcr板時防止錯誤的五大技巧
聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) (pcr) 是生命科學(xué)實驗室中廣為人知的方法之一。pcr 板由的塑料制成，可對收集的樣品或結(jié)果進行出色的處理和分析。它們具有薄而均勻的壁，可提供精確的熱傳遞。在為實時應(yīng)用做準(zhǔn)備時，dna 或 rna 的微小部分被隔離并儲存在 pcr 板中。pcr 板在熱封方面非常有效，并且還限制了熱量的流動。然而，由于 pcr 板有效且可靠，在處理樣品時容易出錯和不準(zhǔn)確。因此，如果您有興趣獲得優(yōu)質(zhì)的pcr板。最好聯(lián)系可靠的 pcr 板制造商。有了這個，您可以確保獲得的價格。以下是一些注意事項，可避免試劑或樣品受到污染，并防止結(jié)果不準(zhǔn)確。
對環(huán)境進行消毒:
由于存在雜質(zhì)，會出現(xiàn)不正確的陽性或陰性結(jié)果，這會讓您懷疑結(jié)果。
雜質(zhì)和污染物以各種形式出現(xiàn)，例如不相關(guān)的 dna 或化學(xué)添加劑，最終會降低反應(yīng)的效率和有效性。
有許多方法可以大大降低 pcr 板的污染率。
使用已滅菌的濾芯吸頭是另一種防止雜質(zhì)通過移液器進入樣品的有用方法。
提供一套干凈的設(shè)備，包括移液器和架子，專門用于 pcr。這將保證實驗室周圍的雜質(zhì)或污染物轉(zhuǎn)移可忽略不計。
在移液器、架子和長凳上使用漂白劑、乙醇來擦去污染物。
為所有 pcr 反應(yīng)分配預(yù)留空間，以進一步減少顆粒污染。
在每一步都使用干凈的手套并經(jīng)常更換。
pcr 板
檢查模板的濃度和純度。
應(yīng)保持使用 pcr 分析樣品時使用的工作臺和設(shè)備的清潔度。在分析和處理之前驗證樣品的純度至關(guān)重要。
通常，分析儀會考慮 dna 樣本的濃度和純度水平。
爭取260nm/280nm的吸光度比不得小于1.8。而隨后使用 230nm 和 320nm 之間的波長來識別雜質(zhì)。
在一個例子中，離液鹽和其他有機化合物在 230nm 的吸收率下被檢測到。同時在 320nm 的吸光度下檢測和驗證 dna 樣品中的濁度。
避免 pcr 板與產(chǎn)品過載：
盡管希望同時運行多個產(chǎn)品，但它會導(dǎo)致 pcr 板的交叉污染。
用不同的產(chǎn)品使 pcr 板超載會浪費，并且很難確定樣品。
保留等分 pcr 試劑的記錄：
連續(xù)冷凍/解凍循環(huán)和頻繁使用等分可能會通過重結(jié)晶損壞 pcr 試劑、酶和 dntp。
在準(zhǔn)備要分析的樣品時，始終努力監(jiān)控使用的等分試樣的速率。
優(yōu)選的 lims 更適合控制試劑和樣品冷凍或解凍的庫存和數(shù)量。
選擇最佳退火溫度。
選擇和使用錯誤的退火溫度是另一種方法 pcr 結(jié)果包含錯誤。
有時，反應(yīng)并沒有按計劃進行。需要降低退火溫度以促進成功的反應(yīng)。
然而，降低溫度會增加假陽性和引物二聚體出現(xiàn)的機會。
在使用 pcr 板時，確認(rèn)熔解曲線的分析具有重要意義，因為它是選擇正確退火溫度的良好指標(biāo)。
引物設(shè)計軟件輔助設(shè)計，提供正確的退火溫度，直接減少 pcr 板中的錯誤。
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