植物莖尖組培實驗過程

發(fā)布時間:2024-07-16
植物莖尖組培實驗過程--1、外植體的選取及預(yù)處理 ⑴外植體選取 選取生長健壯、已發(fā)芽、長勢較好、無病害的生姜根狀莖作為外植體。 ⑵材料預(yù)處理 取帶芽的枝條或鱗莖球莖,洗衣粉適量沖洗,然后扳取或用清潔剪刀剪取帶芽部位(約1cm×1cm大小),頂芽和腋芽、大芽和小芽分開。繼續(xù)用洗衣粉清洗10分鐘,清洗時需不?;蝿印T儆米詠硭疀_洗干凈,置空培養(yǎng)瓶備用。 2、超凈工作臺無菌操作準(zhǔn)備 檢查超凈工作臺,是否已開機滅菌,酒精燈、酒精瓶、升汞是否齊備、無菌水、培養(yǎng)瓶放置與位置、接種器械是否齊備與放置。 3、外植體消毒 ⑴蒸餾水沖洗 外植體置于已殺菌開機的超凈工作臺上,新潔爾滅洗液消毒雙手,無菌蒸餾水清洗外植體2-3次,需隨時晃動。 ⑵酒精消毒 75%酒精倒入裝外植體的容器內(nèi),消毒外植體5-60s,時間長短視植物材料情況而定,一般幼嫩材料和室內(nèi)帶菌培養(yǎng)材料消毒時間短,老材料或室外材料消毒時間長。動作一定迅速,需晃動,然后將酒精倒去。整個時間計算以酒精傾倒開始至酒精倒出瓶外為止, ⑶升汞消毒 1%生汞倒入裝外植體的容器內(nèi),消毒外植體5-10min,時間長短視情況而定。需晃動,在最后3min靜置,升汞注滿容器,將已灼燒的鑷子放入容器升汞內(nèi)浸泡。 10%次氯酸鈉溶液倒入裝外植體的容器內(nèi),消毒外植體10-12min,時間長短視情況而定。 ⑷蒸餾水清洗 用鑷子將外植體取出,放入另一無菌蒸餾水瓶中清洗,反復(fù)清洗4次。 4、材料的整理 用灼燒冷卻的鑷子和剪刀對外植體進(jìn)行處理,剝離外植體材料芽外部小葉片,露出尖端生長點和2-3片葉原基部分,將此部分剪下做培養(yǎng)材料。再用無菌蒸餾水清洗3-4次。 5、接入培養(yǎng)基 培養(yǎng)基瓶放入工作臺內(nèi),將剝離的材料分別用消毒過的鑷子放入培養(yǎng)瓶內(nèi),蓋上瓶蓋,置培養(yǎng)籃內(nèi),寫上培養(yǎng)時間、操作人及培養(yǎng)品名,入培養(yǎng)室培養(yǎng)。
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