如何選擇用于蛋白質(zhì)純化的生物緩沖劑(tris、mops、pipes等)?
在不干擾蛋白質(zhì)活性的前提下,觀測(cè)目標(biāo)的種類(lèi)與使用的純化方式,都會(huì)影響生物緩沖劑的選擇。因此,在進(jìn)行蛋白質(zhì)純化前,要先確定純化的方式,需要測(cè)定的細(xì)胞樣本,以及想得到的研究結(jié)果,再依據(jù)上述變項(xiàng)來(lái)判定并采用合適的生物緩沖劑(tris、mops、pipes等)。
為什么要進(jìn)行蛋白質(zhì)純化?
蛋白質(zhì)純化在生物化學(xué)領(lǐng)域中具有研究?jī)r(jià)值,研究專(zhuān)家能透過(guò)純化的目標(biāo)蛋白質(zhì)來(lái)分析蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)。觀測(cè)酶的活性,剖析基因問(wèn)題,以及研究細(xì)菌細(xì)胞的抗體用以制作抗生素等。
在下文,將幾種常用于蛋白質(zhì)純化的生物緩沖劑,并分享一些基礎(chǔ)信息與大家一起討論。
bis-tris緩沖劑
cas:6976-37-0
緩沖范圍:5.8-7.2
主要應(yīng)用:
可用于各種類(lèi)型的電泳。
與aces緩沖劑一起作為膠體電泳的跑膠緩沖液。
研究報(bào)告指出bis-tris也能用于陰離子交換層析法、核磁共振光譜儀以及x光晶體學(xué)中。
被認(rèn)為是高毒性緩沖劑:二甲基胂酸的替代品。
它不適用于蛋白質(zhì)定量分析。
它會(huì)與人類(lèi)肝臟的脂肪酸結(jié)合蛋白產(chǎn)生相互作用并干擾蛋白質(zhì)動(dòng)力學(xué)。
mops緩沖劑
cas:1132-61-2
緩沖范圍:6.5-7.9
主要應(yīng)用:
可應(yīng)用于層析法。
它會(huì)與牛血清蛋白的肽主鏈相互作用,影響蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性。
pipes緩沖劑
cas:5625-37-6
緩沖范圍:6.1-7.5
主要應(yīng)用:
可應(yīng)用于層析法。
與mes緩沖劑和mops緩沖劑相似,這種緩沖劑缺乏與大多數(shù)金屬離子形成螯合物的能力,可在金屬離子溶液中作為非配位緩沖劑。
tris緩沖劑
cas:77-86-1
緩沖范圍:7.2-9.0
主要應(yīng)用:
可應(yīng)用于離子交換法。
通常用于制備laemmli緩沖液,用于十二烷基硫酸鈉聚丙烯醯胺凝膠電泳中蛋白質(zhì)樣本的變性和上樣。
它可能會(huì)干擾布拉德福蛋白質(zhì)定量法。
不適用于蛋白質(zhì)定量分析。
tris-hcl緩沖劑
cas:1185-53-1
緩沖范圍:7.2-9.0
主要應(yīng)用:
可應(yīng)用于鹽析法中的分離與透析溶液。
可應(yīng)用于離子交換法中的上樣。
可應(yīng)用于親合層析法中的底物溶液。
用于十二烷基硫酸鈉聚丙烯醯胺凝膠電泳中的洗滌劑。
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