細(xì)胞培養(yǎng)常見疑問
培養(yǎng)基中丙酮酸鈉的作用是什么？
答：丙酮酸鈉可以作為細(xì)胞培養(yǎng)中的替代碳源，盡管細(xì)胞更傾向于以葡萄糖作為碳源，但是，如果
沒有葡萄糖的話，細(xì)胞也可以代謝丙酮酸鈉。
倒置相差顯微鏡
倒置顯微鏡一般構(gòu)造與普通顯微鏡一樣有物鏡目鏡光源光路系統(tǒng)等。但倒置顯微鏡的光源位于在載物臺上放，光線由上至下照射到觀察物上，物鏡則位于載物臺下方，觀察培養(yǎng)細(xì)胞多用放大倍數(shù)為 10×和 20×的物鏡，目鏡為 10×。
ø 擦拭鏡頭可用沾酒精/乙混合液或二甲苯的鏡頭紙或脫脂棉。
ø 擦拭涂漆表面，可用紗布除去灰塵。若有油漬污垢，用紗布沾少許汽油去除，不能用有機(jī)溶劑
(如：酒精乙和其它稀釋劑)擦拭涂漆表面和塑料部件。
ø 儀器不使用時，用有機(jī)玻璃或聚乙烯罩上，并存放于干燥且沒有霉菌滋生的地方。
ø 物鏡和目鏡放在有干燥劑的密閉容器中。
1、我把細(xì)胞從-80度的冰箱拿出來復(fù)蘇，期間沒有污染，放二氧化碳孵箱后*天在顯微鏡下看，發(fā)現(xiàn)很多漂浮的死細(xì)胞，貼壁的細(xì)胞很少，但培養(yǎng)液是清亮、桃紅色的，液面上可見漂浮著很多死細(xì)胞(我用的是dmem+10%胎牛血清的培養(yǎng)液)；我又把它放回孵箱；第二天看，和*天一樣，我就換液了；第三天看，鏡下基本未見什么細(xì)胞了。之前師兄給我說這種細(xì)胞長得慢(甲狀腺癌k1細(xì)胞)，但是不至于不長，說明沒有復(fù)蘇成功。
可能的原因有：
a. -80度凍存細(xì)胞的時間太長，一般如果需要長期保存的話，超過一個月。轉(zhuǎn)入液氮。
原有的凍存細(xì)胞狀態(tài)就不好，表現(xiàn)為細(xì)胞活力不夠，細(xì)胞密度不高。
換液太快，培養(yǎng)體系太大，如果細(xì)胞狀態(tài)不好，保持較小的培養(yǎng)容積，以獲得較高的細(xì)胞密度。如果培養(yǎng)基還是桃紅色，說明細(xì)胞的代謝活動很弱，此時不宜換液。不知道你這個細(xì)胞是喜歡聚集生長還是離散生長。根據(jù)條件調(diào)節(jié)。比如，如果喜歡聚堆長，建議先傾斜培養(yǎng)瓶/皿，2h為一個時間間隔，觀察細(xì)胞狀態(tài)，以作調(diào)整。
b.估計是細(xì)胞在凍存時消化過度，導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)不好。
如果*天能見到貼壁的話,說明還是可以的.有時候培養(yǎng)基顏色偏紫,細(xì)胞貼壁會有問題的.你核實一下你培養(yǎng)基顏色是否偏堿.如果偏堿,可以適當(dāng)調(diào)高培養(yǎng)箱二氧化碳的濃度.或者換新的培養(yǎng)基.特別是開啟過的培養(yǎng)基,適用時間長容易出現(xiàn)這個問題.
c.我也遇到以上情況，根據(jù)經(jīng)驗很多次像這樣的情況都是細(xì)胞凍存過程出了問題，另外復(fù)蘇細(xì)胞溶解要迅速，我們有時候水浴鍋刀38度，甚至40度，目的是讓其快速解凍，而且復(fù)蘇*次的培液血清濃度可以相對我高一點，等第二次換液時換回10%。