自1986年第一個單克隆抗體（mab）藥物上市以來，全球已有超過100種單抗藥物獲得了fda批準。經(jīng)過30多年的研究和發(fā)展，單抗藥物以其高度特異性和療效確切的特點，已被用于多種疾病，包括腫瘤、風濕病、血液和感染性疾病等。隨著全球人口老齡化日益加重、慢性病越來越普遍，單抗藥物及過程開發(fā)變得越來越必要。
單克隆抗體（mab）由中國倉鼠卵巢細胞（cho），e. coli和hek等多種不同類型的細胞表達。然而，除了所需的單抗外，這些宿主細胞還會產(chǎn)生其他蛋白質(zhì)，稱為宿主細胞蛋白質(zhì)(hcp)，這些蛋白質(zhì)可能會引起治療效果的改變和患者的免疫原性反應，因此必須在下游純化過程與其他雜質(zhì)一起去除。
抗體純化過程通常用protein a親和層析進行初純，然后通過多個離子交換和疏水相互作用層析進一步純化來自protein a純化后的洗脫物。這些純化步驟可以從上游雜質(zhì)中純化目標抗體，包括去除宿主細胞蛋白(hcp)、宿主細胞dna、protein a滲濾液、內(nèi)毒素、高分子量聚集物和抗體片段。
陰離子交換層析 (anion exchange chromatography, aiex) 一般在protein a 親和純化后用來去除hcp和其他雜質(zhì)。由于蛋白質(zhì)結(jié)合所需的條件和protein a洗脫液的典型高電導性，溶液需要稀釋后才能進行iex，從而需要大容量的儲液罐。離子交換層析通常只會去除 hcp，而不會去除高分子量(hmw)的聚集體，所以還需要疏水相互作用色譜(hic)的額外純化步驟來去除hmw聚集體。與protein a洗脫一樣，hic步驟需要使用高濃度鹽，如硫酸銨，會導致目標產(chǎn)物的沉淀，同時也可能導致總回收率降低。
由于表達系統(tǒng)和上游工藝參數(shù)的不同，hcp雜質(zhì)的分布可能會發(fā)生顯著變化，這使得將hcp去除達到監(jiān)管機構(gòu)要求的水平尤其具有挑戰(zhàn)性。
astrea bioseparations公司設計并開發(fā)了一種吸附劑hcpure，專門用于從使用不同起始原料的混合物中去除hcp和其他雜質(zhì)，表達系統(tǒng)包括但不限于cho,大腸桿菌，hek 293，畢赤酵母，釀酒酵母以及草地貪夜蛾(sf9和sf21)。
hcpure利用的是混合模式純化，與傳統(tǒng)的純化流程相比，具有更高的特異性，有效去除hmw聚集體而不降低產(chǎn)量。使用hcpure純化protein a的洗脫液，可以兼顧多種樣品條件和工藝參數(shù)，不需要稀釋protein a洗脫液，節(jié)省了時間和成本。
主要特點：
•對hcp具有高度特異性
•優(yōu)異的流動性能
•耐用，壽命長，可用naoh消毒，多次循環(huán)使用
•高純度，化學合成的配基
•高批次間一致性
•全面的監(jiān)管支持文件
優(yōu)勢：
•無需離子交換，減少工藝步驟，提高時間效率
•無需在protein a捕獲步驟后稀釋鹽濃度
•穩(wěn)健的的純化平臺，可以根據(jù)目標分析物和上游流程的變化進行調(diào)整，而無需重新驗證工藝
•耐用，易于包裝的purabead®p6hf基礎基質(zhì)
•衍生的90µm purabead p6hf將高流速和高選擇性配體密度相結(jié)合，以最短的停留時間實現(xiàn)高度純化
•在ph 2.0到ph 14.0的非常寬的ph范圍內(nèi)穩(wěn)定
hcpure™在cho細胞中表達的igg原料中 hcp去除的性能
1、在2.5cm柱高的1ml預裝柱中使用hcpure™通過流穿的方式純化protein a
2.cho原料中聚集體的挑戰(zhàn)日益增加
初級捕獲后，樣品用ciex純化，然后在低ph和高鹽條件下導致出現(xiàn)聚集體。將樣品通過hcpure™，由此產(chǎn)生的單抗聚合物減少了近60%
hcpure™在hek中表達的aav原料中 hcp去除的性能
aav2流穿組分的再純化
在使用市售的泛血清型配體進行親和捕獲后，瞬時轉(zhuǎn)染hek 293細胞的aav 2含有一些雜質(zhì)。
洗脫池的ph為7.2,nacl為350mm，負載為5x1013 vp，以流穿模式通過hcpure™在10mm直徑，10cm柱床高的snap柱。elisa法檢測aav2 100%，低ph高鹽條帶中檢出0.9%
hcpure™在e.coli中表達的vκ原料中 hcp去除的性能
1、大腸桿菌原料結(jié)合條件的優(yōu)化
在50 mm tris-citrate緩沖液中結(jié)合。使用6、12和18 ms/cm的電導率，洗脫ph值在ph 6.0和ph 8.0之間變化。
低ph和低電導率條件下hcp的還原率最高
hcpure™在大腸桿菌生產(chǎn)的vκ原料中篩選結(jié)果。在不同的ph值和電導率范圍內(nèi)，對96個井板進行了條件篩選。結(jié)果顯示hcp的減少，見熱圖。
2、hcp清除率和目標產(chǎn)量的優(yōu)化條件展示
使用hcpure™時，hcp濃度降低了2-log以上，從負載的30,000 ppm以上降低到非結(jié)合部分的約200 ppm。非結(jié)合部分的vκ恢復率大于80%，表明目標vκ的結(jié)合幾乎沒有損失。
astrea bioseparations的hcpure™是一種混合模式吸附劑，可以在各種不同的原料中有效地進行純化。對于生產(chǎn)單克隆抗體的客戶，hcpure™已被證明可以減少包括cho和大腸桿菌在內(nèi)的各種原料中的hcp, hcdna和聚集體。對于細胞和基因治療的客戶，hcpure™也已被證明可以去除hcp，同時在hek原料中實現(xiàn)aav的高產(chǎn)量。這種從各種原料中獲得高純度最終產(chǎn)品的能力，使hcpure™成為適應性強的基礎純化平臺。
產(chǎn)品信息：
貨號 產(chǎn)品名稱 規(guī)格
3260-00025 hcpure 25 ml
3260-00100 hcpure 100 ml
3260-00500 hcpure 500 ml
3260-01000 hcpure 1 l
貨號 產(chǎn)品名稱 規(guī)格
6650 hcp clearance p6hf 1 ml column kit 4 x 1 ml columns
6651 hcp clearance p6hf 5 ml column kit 4 x 5 ml columns
4520-3260 robocolumns: 4520-3260（200ul） row of 8 x 200ul columns
4300-3260 evolve®r: 4300-3260 ( -00005 or -00050 depending on volume) 5 ml or 50 ml pre packed columns
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