組織研磨機(jī)對(duì)提取動(dòng)物關(guān)節(jié)軟骨組織總RNA

發(fā)布時(shí)間：2024-07-13

實(shí)驗(yàn)?zāi)康难心テ扑檐浌墙M織（大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨），提取其總rna。實(shí)驗(yàn)原理充分磨碎軟骨樣品（大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨），再用相關(guān)試劑提取其總rna。實(shí)驗(yàn)材料和器具樣品：大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨儀器：多樣品組織研磨儀耗材：研磨罐，研磨珠試劑：液氮若干實(shí)驗(yàn)步驟1.研磨軟骨組織1.1 取適量大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨組織，剪切成約1立方厘米小塊；1.2 將小塊軟骨組織置于液氮中2分鐘或放入-80度冰箱冷凍30分鐘；1.3 將樣品和研磨珠放入研磨罐中，蓋好蓋子；1.4 將裝好樣品及鋼珠的研磨管，放入已經(jīng)在-20度冰箱預(yù)冷好的適配器中，加入變性液，β-巰基乙醇；1.5 將適配器放入凈信研磨儀中，在14單位頻振條件下，研磨1min，可得到勻漿狀的軟骨組織；2.總rna提取2.1 冰水浴下，加酸性水飽和酚，搖勻，加醋酸鈉，氯f(wàn)ang、異戊醇混合液，冰水浴上15min；2.2 4℃下，離心，取上清液，加氯f(wàn)ang、異戊醇混合液，離心取上清，加異丙醇，-20℃下沉淀，離心，得到凝膠狀rna和蛋白多糖混合沉淀，加無(wú)rna酶水，溶解得膠狀溶液；2.3 取膠狀溶液用plant rnaout試劑盒的rna提取步驟得到總rna沉淀，取沉淀，乙醇洗滌后用無(wú)rna酶水溶解沉淀，即得關(guān)節(jié)軟骨組織總rna溶液。