大腸桿菌hms174 (de3)說明書
產(chǎn)品描述
本品為大腸桿菌hms174 (de3)（基因型：k-12,f-,λde3[laci,lacuv5-t7gene1,ind1,sam7,nin5],reca1,hsdr19,in(rrnd-rrne)1,rph-1,rpob331(rifr)）制作的高效感受態(tài)，該菌株源于大腸桿菌k12菌株，含有reca突變。對于能夠?qū)е耫e3噬菌體損失的特定基因，該菌株能夠穩(wěn)定表達(dá)這種基因。de3是溶源性的λde3，帶有t7 rna聚合酶的染色體拷貝，可在iptg誘導(dǎo)下表達(dá)t7 rna聚合酶。hms174 (de3)具有完整的乳糖代謝途徑，故在誘導(dǎo)蛋白表達(dá)時，可以用乳糖同時作為唯yi碳源和誘導(dǎo)劑，因此不需要iptg作為誘導(dǎo)劑，成本比bl21(de3)以葡萄糖做碳源，以itpg做誘導(dǎo)劑的表達(dá)模式低，適合工業(yè)級大規(guī)模表達(dá)外源蛋白。該菌株同時具有利福平抗性。hms174 (de3)是染色體上攜帶lacuv-t7 rna聚合酶基因的專門用于蛋白表達(dá)的k-12菌株。該菌株適用于pet系列載體，及其他t7啟動子系列載體，與blr(de3)類似。經(jīng)puc19 質(zhì)粒（2686bp，ampr）檢測轉(zhuǎn)化效率>1×107 cfu/μg dna。
注意事項
1. 感受態(tài)細(xì)胞解凍后應(yīng)立即使用，不可在冰中放置過長時間。
2. 不能用移液器抽吸感受態(tài)細(xì)胞，用手指輕彈混勻即可。
3. 質(zhì)粒使用量<50 ng即可獲得很好的轉(zhuǎn)化。
使用方法
使用方法
1. 從-80 ℃冰箱中取出感受態(tài)細(xì)胞，放入冰中5 min，加入目的質(zhì)粒或連接產(chǎn)物，輕彈使混合均勻，并在冰中孵育30min；
2. 放42℃水浴鍋中熱激90 s，立即插入冰中靜置2-3 min；
3. 添加900 μl lb液體培養(yǎng)基，37℃搖床220 rpm培養(yǎng)60 min；
4. 離心（質(zhì)粒轉(zhuǎn)化無需離心，吸取100μl菌液涂布即可），倒掉上清，余下菌液均勻涂布抗性平板，37℃培養(yǎng)箱放置過夜。
貨號 品名 規(guī)格 品牌
78bdc10020-10×100ul hms174 (de3) 10×100ul biohub
78bdc10020-50×100ul hms174 (de3) 50×100ul biohub