目的 ：對蛋白沉淀血漿中的強極性化合物直 接進樣分離，以進行生物分析。
背景 ：大多數(shù)生物分析方法都采用蛋白質(zhì)沉淀 (ppt)提取法，這是因為該技術(shù)簡單、快速 且成本較低。典型的ppt使用3:1的有機溶 劑與生物樣品，可得到大約75%的有機提 取物。傳統(tǒng)上，通常會采用反相液相色譜 (rplc)分析樣品。 對于強極性化合物而言，由于強溶劑作用 產(chǎn)生的色譜峰形較差，明顯的是出現(xiàn) 峰前伸和/或譜峰分叉，因此不能直接將高 濃度有機提取物注入rplc系統(tǒng)。因此，在 向色譜系統(tǒng)進樣之前需要進行額外的樣品 處理，包括蒸發(fā)和復(fù)溶或用水稀釋。
通過從rplc到upc2 改變ms入口技術(shù)，無需蒸發(fā)和 復(fù)溶等額外樣品制備步驟，便可以直接進樣分 離高度有機樣品中的極性化合物。
解決方案 ：ultraperformance convergence chromatography™ (upc2®)使用超臨界二氧化碳作為主要流動相， 其保留機制與rplc不同，可直接進樣高度有機 提取物。 在本示例中，通過ppt提取法使用乙腈以3:1的 比率從大鼠血漿中提取了四種極性較強的化 合物，直接進樣至acquity upc2 ™系統(tǒng)中，并使 用傳統(tǒng)rplc系統(tǒng)作為對比。upc2 分析在acquity upc2 beh色譜柱上進行，采用經(jīng)氫氧化銨改性 的甲醇作為共溶劑(流動相b)。rplc分析在配 備acquity uplc beh c18色譜柱的acquity uplc®系 統(tǒng)上進行，采用水和經(jīng)氫氧化銨改性的乙腈 作為流動相。 圖1將含咖fei因的ppt提取物在acquity uplc系統(tǒng) 中的1 µl直接進樣和3 µl直接進樣與在acquity upc2 系統(tǒng)中的7 µl進樣進行了對比。rplc中的 1 µl進樣顯示出良好的峰形，但在3 µl進樣體積 下峰形發(fā)生變形，可以觀察到前伸峰和譜峰分 叉。而采用upc2 進行的7 µl進樣依然表現(xiàn)出良好 的峰形。 以相同方式測試的其它極性分子也觀察到類似 的結(jié)果(表1)。表1還顯示了使用rplc和upc2 時， 在ppt提取物中測試的所有分析物的大進樣體 積。
這些數(shù)據(jù)明確證實了使用沃特世acquity upc2液相色譜系統(tǒng)分析高度有機提取物中極 性化合物的優(yōu)勢，并且不必像rplc系統(tǒng)那樣在進樣前需要進行額外 的樣品制備，從而簡化了工作流程。
總結(jié)：通過從標(biāo)準rplc到upc2 改變ms入口技術(shù)，無需蒸發(fā)和復(fù)溶等額外樣品 制備步驟，便可以直接在acquity upc2 系統(tǒng)中注入溶于高度有機樣品 中的極性化合物。為生物分析實驗室增添upc2 可以簡化高度有機樣品 制劑中極性化合物的分析。