ecotilling （ecotype targeting induced local lesions in genomes）可快速檢測(cè)自然群體中的snp（single nucleotide polymorphism）等dna變異。第一次建立了簡(jiǎn)化的茶樹(shù)ecotilling技術(shù)體系：首先篩選擴(kuò)增目的基因的特異pcr引物；然后通過(guò)celi酶切pcr產(chǎn)物優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，確定酶切時(shí)間20min、10×buffer組成為250mmol／l tris-hci（ph7．4）、150mmol／lkci、15mmol／lmgso4、4lag／mlbsa和0．04％triton x-100，反應(yīng)溫度為47．5℃，酶量為1．8μl cje（celery juice extract）／10μl反應(yīng)體系時(shí)，酶切的譜帶信號(hào)較強(qiáng)、特異性高；初步確定合適的非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)條件為凝膠濃度5％、上樣量4～5μl、有效分離長(zhǎng)度要達(dá)到15cm。利用上述簡(jiǎn)化的ecotilling對(duì)6份茶樹(shù)種質(zhì)870bp的ppo基因片段實(shí)現(xiàn)了分型，經(jīng)測(cè)序驗(yàn)證酶切產(chǎn)生的譜帶與6份種質(zhì)內(nèi)部或不同種質(zhì)間的snp位置吻合。完成機(jī)構(gòu)：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所茶樹(shù)資源與改良研究中心／國(guó)家茶樹(shù)改良中心,浙江杭州310008